[發(fā)明專利]一種可拋式雙酚A適配體生物傳感器的制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810044511.1
• 申請(qǐng)日: 2018-01-17
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108226251B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-01-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張慶;欒雅楠;李海玉;王婉;白樺
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院
• 主分類(lèi)號(hào): G01N27/327
• 分類(lèi)號(hào): G01N27/327;G01N27/48
• 代理公司: 11416 北京律恒立業(yè)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙)
• 代理人: 裴大牛;顧珊

1.一種可拋式雙酚A適配體的生物傳感器的制備方法，其特征在于：包括如下步驟：

步驟一、清洗PET薄膜(1)，并在其上濺射一層納米尺度的金膜(2)；所述金膜(2)采用高真空離子濺射儀濺射，濺射時(shí)間為80s-100s，濺射電流為20-30mA，濺射真空度不低于6×10^-3mbar，靶材距樣品臺(tái)的距離為9cm，濺射后的所述金膜(2)的厚度為16-20nm；

步驟二、將濺射好的所述PET薄膜(1)取出，裁剪成工作電極的尺寸；

步驟三、在所述金膜(2)上設(shè)置有透明膠帶(3)，在所述透明膠帶(3)上設(shè)置有圓形的通孔(4)，所述通孔(4)所在的區(qū)域?yàn)殡姌O區(qū)，所述透明膠帶(3)覆蓋的區(qū)域?yàn)榻^緣區(qū)，其余區(qū)域?yàn)閷?dǎo)線區(qū)；

步驟四、對(duì)所述電極區(qū)的表面進(jìn)行雙酚A適配體修飾，得到雙酚A適配體修飾的金納米粒子電極：所述雙酚A適配體的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO:1所示，將含有0.05μMTCEP的濃度為1μM的雙酚A適配體溶液100μL滴涂在所述電極區(qū)的表面，放置于4℃的冰箱內(nèi)12h，用去離子水沖洗所述電極區(qū)的表面，氮?dú)獯蹈桑?/p>

步驟五、采用MCH溶液對(duì)所述電極區(qū)的表面進(jìn)行鈍化：取100μL濃度為1mM的MCH滴涂于所述電極區(qū)的表面，在室溫下靜置2h后用去離子水沖洗，氮?dú)獯蹈桑?/p>

步驟六、形成適配體-MB復(fù)合物：將0.1mM的MB滴涂在所述電極區(qū)的表面，室溫下靜置2h，去離子水沖洗并氮?dú)獯蹈桑玫叫揎椇蟮墓ぷ麟姌O。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的可拋式雙酚A適配體的生物傳感器的制備方法，其特征在于：步驟一中所述PET薄膜(1)的清洗方法如下：先用無(wú)水乙醇超聲清洗兩次，去除表面的有機(jī)物，然后用離子水清洗兩次，60℃烘箱烘干。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的可拋式雙酚A適配體的生物傳感器的制備方法，其特征在于：步驟一中所述PET薄膜(1)長(zhǎng)為4.8cm，寬為4cm，步驟二中所述工作電極的長(zhǎng)為4cm，寬為1.2cm，所述透明膠帶(3)的長(zhǎng)為2.5cm，寬為1.2cm，所述通孔(4)的直徑為10mm，所述通孔(4)的圓心距離所述PET薄膜(1)的前端之間的距離為7mm。

4.一種溶液中痕量雙酚A的測(cè)定方法，其特征在于：包括如下步驟：

標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制：配制不同濃度的雙酚A標(biāo)準(zhǔn)溶液，濃度分別為0.1μg/L,1μg/L,10μg/L,100μg/L,500μg/L,700μg/L,1000μg/L；

采用權(quán)利要求1所述的方法制備得到的可拋式雙酚A適配體的生物傳感器進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定前，將不同濃度的雙酚A標(biāo)準(zhǔn)溶液滴涂在所述電極區(qū)的表面，室溫下反應(yīng)30min，然后用去離子水充分沖洗，氮?dú)獯蹈桑?/p>

電化學(xué)檢測(cè)及線性曲線：將所述可拋式雙酚A適配體的生物傳感器作為工作電極，以鉑電極為對(duì)電極(6)，Ag/AgCl電極作為參比電極(5)，組成三電極體系，在pH值為7.0的0.5mM磷酸緩沖溶液中進(jìn)行線性掃描伏安LSV測(cè)定，掃描速率為50mVs^-1，掃描范圍為-0.4V—+0.2V。