[發明專利]一種液體菌種及其發酵方法

在審

• 申請號: 201810042675.0
• 申請日: 2015-06-11
• 公開（公告）號: CN108251314A
• 公開（公告）日: 2018-07-06
• 發明（設計）人: 李建樹
• 申請（專利權）人: 天津中天精科科技有限公司
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;A01G18/40;A01G18/20;C12R1/645
• 代理公司: 北京瑞盛銘杰知識產權代理事務所(普通合伙) 11617
• 代理人: 鄭海松

1.一種液體菌種的發酵方法，其特征在于，包括如下步驟：將保存的杏鮑菇斜面菌種經平板培養基活化后依次經液體種子培養基、搖瓶種子培養基和種子罐培養基逐級擴大培養得到種子罐種子，首先將種子罐種子以8％接種量接種于30L發酵罐，發酵培養基裝液量15L,于30-32℃、通氣量3-5L/min恒溫發酵12-24h,然后以0.3-0.5℃/min的速率降溫至18-22℃，向發酵罐中加入7-9g包被殼聚糖和900mL種子罐種子，在通氣量6-8L/min條件下恒溫發酵10-16h，最后以0.2-0.4℃/min的速率升溫至24-26℃，在通氣量5-7L/min條件下恒溫發酵45-52h即得液體菌種；

所述發酵培養基的組成為：黃豆餅粉60g/L，葡萄糖10g/L，蛋白胨5g/L，中草藥提取物1.5-2g/L，木屑粉0.6-1.0g/L，磷酸二氫鉀0.5g/L，硫酸鎂0.5g/L，VB₁ 0.01g/L，余量為水，pH值6.0；

所述中草藥提取物的制備方法，包括如下步驟：按重量份數計，稱取黃芪30份，干姜30份，陳皮30份，牛黃25份，丹皮25份，甘草20份，知母18份，金銀花18份，魚腥草17份，赤芍15份，黃芩15份，川芎10份，當歸8份；置盛有0.2％碳酸氫鈉溶液的超聲波清洗機中于200W、30KHz清洗12min，瀝干，將上述中草藥粉碎至粒徑為2毫米以下，置容器中均勻混合并添加5倍重量的水，得混合物料，控制溫度80℃保持3h，接著降溫至45℃，用乳酸調節pH值為4，在功率200W條件下進行微波提取12min，同時在功率250W,頻率35KHz條件下進行超聲波輔助提取；然后加入混合物料總重量1.0％的混合酶進行酶解，用乳酸調節pH值為6.2，酶解3h，最后添加混合物料2倍重量乙醇和丙醇的混合物，乙醇和丙醇混合的質量比為1:2，控制溫度至70℃保持3.5h，過濾，得第一濾液；添加濾渣2倍重量的水，控制溫度90℃保持2h，然后降溫至30℃，過濾，得第二濾液；將第一濾液和第二濾液按照質量比3:2合并,濾液真空濃縮后冷凍干燥、粉碎即得中草藥提取物；

所述混合酶為葡聚糖酶、木聚糖酶、戊聚糖酶、果膠酶按質量比3:2:2:1均勻混合；

所述木屑粉的制備方法包括如下步驟：將無發霉、無病蟲鋸木末或廢木屑除去雜物，置于裝有質量百分比濃度0.5％的碳酸氫鈉溶液的超聲波清洗機中于200W、30KHz清洗10min，沖洗、瀝干，放入蒸汽釜中于0.3-0.4MPa蒸煮20-30min,取出，瀝干，與植物油按質量比100:1均勻混合，然后將混合物置微波干燥機于2000W、120℃微波輻照5min，最后超微粉碎至粒徑0.3-0.5mm,密封包裝即得木屑粉；

所述發酵培養基的制備方法為：按照培養基配方準確稱量各原料，首先取黃豆餅粉質量4-6倍的水，用乳酸調節pH值為5-6，加入5u/g黃豆餅粉的耐高溫a-淀粉酶,邊攪拌邊加入黃豆餅粉，升溫至90-95℃，保溫，液化10-15min,然后降溫至50-60℃，保溫，邊攪拌邊加入40u/g黃豆餅粉的糖化酶和30u/g黃豆餅粉的蛋白酶水解20-30min，邊攪拌邊加入剩余水和其它原料，均勻混合，調整pH值為6.0，121-123℃滅菌30-40min即得發酵培養基；

所述包被殼聚糖的制備方法包括如下步驟：取殼聚糖加入其質量20-40％的質量百分比濃度為13-15％的α-環狀糊精水溶液中，制成軟材，用10-20目篩制粒，得濕顆粒，置微波干燥機中于功率2000W、60-80℃干燥4-6min，用10-20目篩快速整粒即得包被殼聚糖。

2.如權利要求1所述的一種液體菌種的發酵方法，其特征在于，所述液體種子培養基組成為：葡萄糖30g/L，酵母浸出汁5g/L，蛋白胨2g/L，瓊脂2g/L，中草藥提取物0.3-0.5g/L，磷酸二氫鉀0.5g/L，硫酸鎂0.5g/L，木屑粉0.1-0.3g/L，VB₁ 0.01g/L，余量為水，pH值6.0。

3.如權利要求1所述的一種液體菌種的發酵方法，其特征在于，所述搖瓶種子培養基組成為：黃豆餅粉60g/L，葡萄糖10g/L，蛋白胨5g/L，中草藥提取物0.5-1.0g/L，磷酸二氫鉀0.5g/L，硫酸鎂0.5g/L，木屑粉0.2-0.4g/L，VB₁ 0.01g/L，余量為水，pH值6.0。