[發明專利]一種副溶血弧菌噬菌體微生態制劑及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 201810042463.2
• 申請日: 2018-01-17
• 公開（公告）號: CN108018262A
• 公開（公告）日: 2018-05-11
• 發明（設計）人: 姜宗然;付漢清;郭立
• 申請（專利權）人: 廈門昶科生物工程有限公司
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;C12Q1/04;C12R1/92
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 劉奇

本發明提供了一種副溶血弧菌噬菌體微生態制劑及其制備方法和應用，屬于微生物技術領域。所述制備方法是將副溶血弧菌液和副溶血弧菌噬菌體液接種至發酵培養液中進行發酵培養；在發酵培養進行至6～12h時，向宿主發酵液中流加副溶血弧菌液，繼續發酵培養，整個發酵周期控制在18～24h，發酵液進行滅活副溶血弧菌宿主，得到副溶血弧菌噬菌體微生態制劑。本發明通過控制發酵流加時機為發酵培養進行6～12h，流加副溶血弧菌液，能夠實現不延長發酵時間的前提下，大大提高副溶血弧菌噬菌體的效價。

技術領域

本發明屬于微生物技術領域，具體涉及一種副溶血弧菌噬菌體微生態制劑及制備方法和應用。

背景技術

目前，控制和消除致病菌的主要手段仍是各種物理或化學的方法，包括各種抗生素的使用。物理或化學的方法都存在著明顯的弊端。首先，物理的方法對各種致病菌的消除作用只能應用于相關領域的某一環節，不能實現整個領域所有環節的應用。其次，化學方法中的酸堿處理雖可以取得一定防治效果，但在有害菌形成生物膜后，這些方法的效果就極不理想。微生物生態制劑的研究開發受到各方關注，特別是噬菌體的研究受到人們的青睞。從噬菌體被Frederick Twort(1915)和Félix DHérelle(1917)發現開始，歐洲和前蘇聯等國家，就已經便開始用噬菌體來治療細菌感染。然而在青霉素、鏈霉素等抗生素的崛起，以及早期噬菌體藥物失效快等缺點這些藥物很快就被淘汰了。抗生素雖然開始使用效果顯著，但是長期使用，不僅會增強病原菌的抗藥性，而且抑制有益菌群，最終不能有效地控制、消除致病菌。20世紀90年代末，很多科研工作者倡導重新應用噬菌體到臨床治療上來，噬菌體療法逐漸復蘇。此外，噬菌體本身具有廣泛的應用，例如用于細菌鑒定和分型，用于診斷和治療疾病，還用作分子生物學研究的實驗工具。因此，噬菌體廣泛的應用價值促進噬菌體的發酵生產越來越受到人們的關注。

目前，噬菌體的發酵生產方法有很多，例如，專利申請號為94114314.7，名稱為“噬菌體生態制劑的制備方法”的發明專利申請提出一種培養基培養方法：在10L放水瓶，裝液為5000ml使用宿主弧菌培養噬菌體5～7天，最終噬菌體效價為105～108PFU/ml。專利申請號200810145709.5的發明專利使用宿主弧菌凍干粉作為營養源，噬菌體的效價也不高，為1×107PFU/ml。專利申請號200810202809.7的發明專利中使用嗜水氣單胞菌進行噬菌體的生產，發酵周期長，為72～120h，噬菌體效價為1×108PFU/ml。上述專利中公開的噬菌體的發酵方法均存在噬菌體效價低的問題。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供一種副溶血弧菌噬菌體微生態制劑及其制備方法和應用，所述制備方法發酵得到高效價的副溶血弧菌噬菌體。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明提供了一種副溶血弧菌噬菌體微生態制劑的制備方法，包括以下步驟：

1)將副溶血弧菌液接入發酵培養基中培養，得到宿主發酵液；副溶血弧菌宿主在發酵培養基中的初始菌體濃度為1010～1016CFU/ml；

2)將濃度為108～1016PFU/ml的副溶血弧菌噬菌體液接種至所述宿主發酵液中發酵培養；副溶血弧菌噬菌體液的接種量為1％～10％；

3)所述步驟2)中發酵培養進行6～12h時，向得到的宿主發酵液中流加副溶血弧菌液，繼續發酵培養，控制整個發酵周期為18～24h，得到發酵液；

4)將所述步驟3)中得到的發酵液進行滅活副溶血弧菌宿主，得到副溶血弧菌噬菌體微生態制劑。