[發(fā)明專利]水稻低直鏈淀粉含量基因Wx-mq的分子標(biāo)記特異性引物及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810042407.9
• 申請(qǐng)日: 2018-01-17
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108103228A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-06-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王曉靜;孫林靜;孫玥;張融雪;閆雙勇;李軍玲;崔中秋;蘇京平;王勝軍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天津市農(nóng)作物研究所
• 主分類號(hào): C12Q1/6895
• 分類號(hào): C12Q1/6895;C12N15/11;C12Q1/686
• 代理公司: 天津市杰盈專利代理有限公司 12207
• 代理人: 朱紅星

1.水稻低直鏈淀粉含量基因Wx-mq的分子標(biāo)記特異性引物，其特征在于該分子標(biāo)記的上游引物WxF為SEQ ID NO.1，下游引物WxR為SEQ ID NO.2；擴(kuò)增產(chǎn)物大小為200 bp。

2.權(quán)利要求1所述水稻低直鏈淀粉含量基因Wx-mq的分子標(biāo)記特異性引物在用于鑒定水稻品種資源中是否含有隱形純合的Wx-mq基因的應(yīng)用。

3.權(quán)利要求1所述水稻低直鏈淀粉含量基因Wx-mq的分子標(biāo)記特異性引物在用于提高含Wx-mq基因品種的選擇效率的應(yīng)用。

4.采用權(quán)利要求1所述的特異性引物進(jìn)行水稻低直鏈淀粉含量基因Wx-mq的分子標(biāo)記檢測(cè)方法，其特征在于按如下的步驟進(jìn)行：

（1）取水稻樣品，提取水稻樣品基因組DNA；

（2）利用SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的分子標(biāo)記引物，對(duì)所述的水稻樣品基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，PCR擴(kuò)增產(chǎn)物在8%非變性聚丙烯酰胺凝膠上進(jìn)行電泳檢測(cè)，擴(kuò)增出200 bp的目標(biāo)條帶后進(jìn)行Miu I限制性內(nèi)切酶的檢測(cè)；酶切后僅有200 bp一條條帶的品種為含有純合隱性Wx-mq突變基因的水稻品種；切出200 bp，176 bp和24 bp三條帶的品種為含有雜合Wx-mq基因的水稻品系；僅切出176 bp和24 bp兩條帶的品種為含Wx-mq等位基因Wx-b的水稻品種（系）。

5.權(quán)利要求4所述的水稻低直鏈淀粉含量基因Wx-mq的分子標(biāo)記檢測(cè)方法，其特征在于第一步PCR反應(yīng)：PCR擴(kuò)增的反應(yīng)體系為：總體積20mL，包括: ddH2O 12.5μL、10×Buffer(含20 mmol/L Mg2+) 2μL、10 μM引物2μL、2.5 mM dNTP 1μL、TagDNA聚合酶(2 U/μL) 0.5μL、水稻樣品基因組模板DNA 2μL；

反應(yīng)程序?yàn)? 94°C 10 min；94°C 30 s，60°C 30 s，72°C 30 s，30個(gè)循環(huán)；72°C 10min，取3μL擴(kuò)增產(chǎn)物在8%非變性聚丙烯酰胺凝膠上進(jìn)行電泳檢測(cè)，如果擴(kuò)增出200 bp的分子標(biāo)記DNA片段，標(biāo)志著Wx-mq基因或其等位基因Wx-b的存在。

6.權(quán)利要求4所述的水稻低直鏈淀粉含量基因Wx-mq的分子標(biāo)記檢測(cè)方法，其特征在于第二步酶切反應(yīng)：取10μL的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，在其中加入限制性內(nèi)切酶Miu I，酶切反應(yīng)體系為：總體積15mL，包括: ddH2O 3μL，10′Buffer 1.5mL，PCR擴(kuò)增產(chǎn)物10μL，限制性內(nèi)切酶Miu I (10 U/μL) 0.5mL，將反應(yīng)體系在37°C條件下反應(yīng)5h后，酶切產(chǎn)物在8%非變性聚丙烯酰胺凝膠上進(jìn)行電泳檢測(cè)，然后在白光透射儀上照相，記錄結(jié)果。