[發明專利]雙載體系統及其用途

有效

• 申請號: 201810041670.6
• 申請日: 2015-03-05
• 公開（公告）號: CN108251431B
• 公開（公告）日: 2020-12-08
• 發明（設計）人: 劉志剛;沈世杰;劉玉蘭;郭晶晶;郝小勃
• 申請（專利權）人: 北京百特美博生物科技有限公司;北京智仁美博生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/13
• 分類號: C12N15/13;C12N15/70;C07K16/24;C12R1/19
• 代理公司: 北京英賽嘉華知識產權代理有限責任公司 11204
• 代理人: 王達佐;洪欣

本申請公開了一種用于在細菌中表達Fab抗體片段的雙質粒系統，包含第一質粒和第二質粒，其中所述第一質粒包含抗體輕鏈(VL?CL)表達單元，所述第二質粒包含抗體重鏈VH?CH1表達單元；所述第一質粒和第二質粒包含在所述細菌中相容的不同復制原點；并且所述抗體輕鏈表達單元和抗體重鏈VH?CH1表達單元使用相同的原核啟動子。本申請還公開了所述雙質粒系統的用途。

技術領域

本發明為基因工程抗體藥物領域，特別是抗人IL-17的單克隆抗體領域。本發明涉及人源性功能性抗人IL-17單克隆抗體，以及這類抗體在治療人IL-17介導的疾病中的用途。

背景技術

白細胞介素17(IL-17)家族目前包括IL-17A、IL-17B、IL-17C、IL-17D、IL-17E和IL-17F六種細胞因子。IL-17家族的成員與任何其它已知的細胞因子沒有序列相似性，而且家族成員之間的序列相似性也比較低(Gaffen SL,Nat.Rev.Immunol.2009Aug；9(8):556-67)。IL-17家族成員的功能主要是參與免疫應答的調節。白細胞介素IL-17A(以下簡稱IL-17)是20-30kD的同源二聚體糖蛋白,其主要由活化的CD4⁺T細胞產生并作為促炎細胞因子起作用。IL-17由活化的T細胞在炎性位點分泌,而不在體循環中分泌。IL17具有多種生物學特性,包括上調黏附分子并在多種細胞類型包括滑膜細胞、軟骨細胞、成纖維細胞、內皮細胞、上皮細胞、角質形成細胞和巨噬細胞中誘導產生大量炎性細胞因子和趨化因子。同樣，IL-17通過誘導趨化因子的釋放誘導嗜中性粒細胞聚集到炎性位點上，刺激前列腺素和金屬蛋白酶的產生，并抑制蛋聚糖的合成。此外，IL-17在造血祖細胞的成熟中起重要作用。IL-17在不同的器宮和組織包括肺、關節軟骨、骨、腦、造血細胞、腎、皮膚和腸中具有信號轉導功能。因此，由IL-17A/Th17介導的免疫反應是全身性的，由此引發的炎癥反應主要表現為中性粒細胞浸潤。

大量的研究已經證實IL-17的增加與多種疾病有關，包括呼吸道炎癥、類風濕性關節炎(RA)、骨關節炎、骨侵蝕、腹膜內膿腫與粘連炎癥(IBD)、同種異體移植排斥、牛皮癬、某些類型的癌、血管發生、動脈粥樣硬化和多發性硬化(MS)等(Witkowski等人，Cell.Mol.Life Sci.61:567-579,2004)。而且，IL-17在膠原基質分解、炎癥及關節損傷等方面與IL-1b具有相對獨立的效應，而且IL-17具有與TNF-a協同擴大炎癥的生物學效應。進一步的研究證實，通過結合IL-17的特異性抗體或可溶性IL17受體阻斷IL-17的體內生物學活性時，可以有效減少了多種動物關節炎模型中的炎癥和骨侵蝕。因此，IL-17成為治療RA和其它自身免疫性疾病的新靶標，而且由于IL17主要集中于炎癥部位，因而靶向IL17的藥物可能較靶向其它參與體循環的促炎細胞因子(如TNF)等具有潛在的更高安全性。

目前歐盟和美國FDA都已經批準用Novartis公司的Cosentyx治療中重度斑塊狀銀屑病成人患者，而Cosentyx的活性成份是secukinumab，是一種IL-17的單抗。但是本領域仍然需要更多適于治療患者的改善的抗IL-17抗體。

發明內容

本發明的目的在于提供一種新型抗人IL-17的單克隆抗體或其片段，編碼該單克隆抗體或其片段的多核苷酸的載體、宿主細胞、制備和純化該抗體的方法及臨床應用。由本發明涉及的抗體基因可變區的序列，可構建全長的抗體分子作為藥物用于臨床上由人IL-17介導的自身免疫系統疾病使用。這些適應癥包括但不局限于下列：銀屑病、類風濕性關節炎或強直性脊柱炎。

本發明構建了大容量的天然人源噬菌體抗體庫，從中篩選得到了全人源抗IL-17單克隆抗體。

本發明的抗體為全人源的單克隆抗體，拮抗至少一種與IL-17或其部分相關的體外或體內生物活性。

在一個實施例中，本發明抗體的特征在于對人IL-17具有強結合親和力。