[發明專利]雙載體系統及其用途有效
| 申請號： | 201810041670.6 | 申請日： | 2015-03-05 |
| 公開（公告）號： | CN108251431B | 公開（公告）日： | 2020-12-08 |
| 發明（設計）人： | 劉志剛;沈世杰;劉玉蘭;郭晶晶;郝小勃 | 申請（專利權）人： | 北京百特美博生物科技有限公司;北京智仁美博生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/13 | 分類號： | C12N15/13;C12N15/70;C07K16/24;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京英賽嘉華知識產權代理有限責任公司 11204 | 代理人： | 王達佐;洪欣 |
| 地址： | 100079 北京市豐*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 載體 系統 及其 用途 | ||
1.一種用于在細菌中表達Fab抗體片段的雙質粒系統，包含第一質粒和第二質粒，其中：
所述第一質粒包含抗體輕鏈(VL-CL)表達單元，所述第二質粒包含抗體重鏈VH-CH1表達單元；
所述第一質粒和第二質粒包含在所述細菌中相容的不同復制原點，其中所述不同復制原點分別為pBR ori和SEQ ID NO：20所示的CDF ori；并且
所述抗體輕鏈表達單元和抗體重鏈VH-CH1表達單元使用相同的原核啟動子。
2.如權利要求1所述的雙質粒系統，其中所述細菌為大腸桿菌。
3.如權利要求1所述的雙質粒系統，其中所述啟動子為可誘導啟動子。
4.如權利要求3所述的雙質粒系統，其中所述啟動子為阿拉伯糖啟動子(Para)或者乳糖啟動子(Plac)。
5.如權利要求1所述的雙質粒系統，其中所述抗體輕鏈恒定區為SEQ ID NO：17所示的kappa輕鏈恒定區或者SEQ ID NO：19所示的lambda輕鏈恒定區。
6.如權利要求1所述的雙質粒系統，其中所述重鏈恒定區CH1段選自IgG1、IgG2、IgG3或者IgG4亞型。
7.如權利要求1所述的雙質粒系統，其中所述第一質粒和第二質粒包含不同抗生素抗性基因。
8.如權利要求7所述的雙質粒系統，其中所述抗生素抗性基因選自氨芐青霉素抗性基因(Ampr)、氯霉素抗性基因(CmR)、卡那霉素抗性基因(KaR)或者四環素抗性基因(TetR)。
9.如權利要求1所述的雙質粒系統，其中所述第一質粒和第二質粒包含相同的編碼信號肽的核酸分子。
10.如權利要求9所述的雙質粒系統，其中所述信號肽為SEQ ID NO：6所示的PelB信號肽。
11.如權利要求1所述的雙質粒系統，其中所述第一質粒包含氯霉素抗體基因(CmR)和SEQ ID NO：20所示的CDF ori，第二質粒包含氨芐青霉素抗性(Ampr)和pBR ori。
12.如權利要求1所述的雙質粒系統，其包含SEQ ID NO：18所示的融合基因。
13.權利要求1-12中任一項所述的雙質粒系統在制備Fab抗體片段中的用途。
14.權利要求1-12中任一項所述的雙質粒系統在噬菌體呈現Fab抗體或Fab抗體庫中的用途。
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