[發明專利]一種新型低分子量肝素的制備方法

在審

• 申請號: 201810039954.1
• 申請日: 2018-01-16
• 公開（公告）號: CN108179161A
• 公開（公告）日: 2018-06-19
• 發明（設計）人: 陳蔭;趙玉勤;孫坤來;王斌
• 申請（專利權）人: 浙江海洋大學
• 主分類號: C12P19/26
• 分類號: C12P19/26
• 代理公司: 杭州九洲專利事務所有限公司 33101
• 代理人: 翁霽明

1.一種新型低分子量肝素的制備方法，其特征在于所述的制備方法包括如下步驟：

a）Phe-Leu-Asn-Gln-Asp和sepharose交聯；

b）交聯后凝膠加入8—12倍體積46—54mM磷酸鈉緩沖液，pH7.2—7.5，溶脹后吸去上清；

c）肝素溶在1—1.5倍體積緩沖液中，0.5—1.5mg凝膠配比3mg肝素的比例上樣，上樣后玻璃棒攪拌3—10min后，靜置15—35min，吸去上清；

d）肝素的活性中心位點吸附在凝膠的五肽上后，按1—5mg肝素加入2 mU肝素酶II的比例，在水浴中35—40 ℃攪拌水解2—5h；

e）肝素游離的部分就被隨機部分水解，水解后4000rpm離心，取沉淀；

f）沉淀中加入一倍體積的1M的NaCl溶液后離心，取上清；

g）85—95 ℃水浴加熱10—20min使酶滅活，4000rpm離心去除酶的沉淀，上清濃縮后bio-gel P2柱子去掉鹽分自動部分收集，220nm紫外檢測，去掉鹽分，收集有紫外吸收部分合并，凍干即得到脫鹽后不含活性位點的低分子量肝素。

2.根據權利要求1所述的新型低分子量肝素的制備方法，其特征在于：

所述的步驟b）中，交聯后凝膠加入10倍體積50mM磷酸鈉緩沖液，pH7.4，溶脹后吸去上清；

所述的在步驟c）中，肝素溶在1倍體積緩沖液中，1mg凝膠配比3mg肝素的比例上樣，上樣后玻璃棒攪拌5min后，靜置20min，吸去上清；

所述的步驟d）中，肝素的活性中心位點吸附在凝膠的五肽上后，按3mg肝素加入2 mU肝素酶II的比例，在水浴中37 ℃攪拌水解4h；

所述的步驟g）中，90 ℃水浴加熱15min使酶滅活。