[發明專利]大口黑鱸生長相關的SNP位點及其應用

有效

• 申請號: 201810037972.6
• 申請日: 2018-01-16
• 公開（公告）號: CN110041422B
• 公開（公告）日: 2022-07-19
• 發明（設計）人: 李勝杰;樊佳佳;姜鵬;白俊杰;孫建國;吳建開
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院珠江水產研究所
• 主分類號: C07K14/46
• 分類號: C07K14/46
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 胡輝;舒勝英

1.一種大口黑鱸生長速度相關的SNP分子標記，其位于HSC70-1基因序列SEQ ID NO：2所示的第821位堿基、第2804位堿基，其第821位堿基為C或G，第2804位堿基為A或T。

2.檢測權利要求1所述SNP分子標記的試劑在判斷大口黑鱸生長快慢中的應用。

3.檢測權利要求1所述SNP分子標記的試劑在篩選快速生長大口黑鱸中的應用。

4.一種篩選快速生長大口黑鱸的方法，其特征在于，檢測大口黑鱸HSC70-1基因序列SEQ ID NO：2的第821位堿基處的SNP分子標記是否為CC純合體，若是，則為快速生長的大口黑鱸；或/和，檢測HSC70-1基因序列SEQ ID NO：2的第2804位堿基處的SNP分子標記是否為TT純合體，若是，則為快速生長的大口黑鱸。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，包括如下步驟：

1）提取大口黑鱸DNA；

2）以提取得到的DNA為模板，PCR檢測大口黑鱸HSC70-1基因序列第821、2804位堿基處的SNP分子標記是否分別為CC、TT純合體。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述PCR檢測的具體操作為，分別利用引物P1F和P1R、P2F和P2R對大口黑鱸DNA進行初次PCR擴增，得到初次PCR產物，

P1F：5'- TGAAGCCTACCTCGGAAAAGT -3'（SEQ ID NO.3），

P1R：5'- AGCATCCTTAGTGGCCTGGCGC -3'（SEQ ID NO.4），

P2F：5'- TCCACCAGCTTATCAGACTGT -3'（SEQ ID NO.5），

P2R：5'- GGTCAACCCTCCAAGTAACTT -3'（SEQ ID NO.6）；

再將初次PCR產物分別用引物P1和P2進行延伸擴增，將所得產物經測序分析，確定大口黑鱸HSC70-1基因序列第821、2804位堿基處的SNP分子標記是否分別為CC、TT純合體；

P1：5'- TTACTTAGCATAGCTCTGGACA -3'（SEQ ID NO.7），

P2：5'- CTGTAGGGGGTAACTGAAGGGT -3'（SEQ ID NO.8）。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，初次PCR擴增的反應體系為：

DNA 1μl

10×buffer 1.5μl

25mmol 的MgCl₂ 1.5μl

dNTP 0.3μl

上游引物 0.15μl

下游引物 0.15μl

Taq酶 0.3μl

H₂O 補至15μl；

初次PCR擴增反應程序為：94℃預變性3min；94℃變性15s，56℃退火15s，72℃延伸30s，24個循環；72℃延伸3min。