[發明專利]一種血液透析液檢測方法及其在生脈注射液藥動學-藥效學中的應用

有效

• 申請號: 201810036694.2
• 申請日: 2018-01-15
• 公開（公告）號: CN108362807B
• 公開（公告）日: 2021-02-19
• 發明（設計）人: 詹淑玉;邵青;丁寶月;阮鈺爾;黃嬛;黃雄;劉國強;呂曉慶;姜寧華
• 申請（專利權）人: 嘉興學院
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N30/06;G01N30/74
• 代理公司: 北京東方盛凡知識產權代理事務所(普通合伙) 11562
• 代理人: 張換君

本發明涉及醫藥技術領域，具體是一種血液透析液檢測方法及其在生脈注射液藥動學?藥效學中的應用，包括制備清醒大鼠在體微透析取樣裝置采集血液透析液，采用高效液相色譜?三重四級桿質譜方法分析血液透析液中活性成分的藥物濃度，并采用高效液相色譜?熒光檢測技術測定血液透析液中藥效指標NO。本發明采用清醒大鼠在體微透析技術，克服了動物麻醉和血液量損失對藥動學和藥效學行為的影響，成功地運用于生脈注射液抗大鼠心肌缺血的血藥濃度?時間和藥效?時間關系研究，并建立了藥動學?藥效學結合模型。本發明研究表明，當選擇合適的血液內源性生物標記物作為藥效指標，清醒動物在體微透析采樣技術將成為藥動學?藥效學結合研究的理想工具。

技術領域

本發明涉及醫藥技術領域，具體地說，是一種清醒大鼠在體微透析采樣技術結合透析液檢測方法，用于研究異丙腎上腺素(ISO)誘導的心肌缺血大鼠給藥生脈注射液后的藥動學-藥效學相關性。

背景技術

生脈注射液是由紅參、麥冬、五味子三味中藥組成的復方制劑，在臨床上廣泛用于治療心肌梗塞、心源性休克、感染性休克等癥，是一種確有療效的中藥注射劑。藥理研究表明，生脈注射液具有對心肌氧化損傷的抗氧化保護活性，增加冠脈血流量，降低心肌耗氧量，改善心肌能量代謝，增加心肌收縮力，降低外周阻力，提高機體抗缺氧能力等藥理作用。生脈注射液雖然臨床應用廣泛，但是關于其體內藥代動力學以及藥動學-藥效學結合研究還非常薄弱，因此以生脈注射液多種活性成分為藥代標記物，選擇合適的生物標記物作為藥效指標，分析血藥濃度-時間和藥效-時間關系并建立藥動學-藥效學結合模型，對于指導藥物的二次開發以及生脈注射液的臨床合理用藥十分必要。

微透析技術能夠實時、在線對實驗動物進行連續采樣，其活體微創、動態觀察、定量分析、采樣量小的特點特別適合于研究生物體內源性物質和外源性藥物的動態變化過程，所以在過去的幾十年里，微透析采樣技術在臨床前和臨床藥動學、藥效學和藥動學-藥效學結合研究領域得到了廣泛的應用。但是縱觀文獻，目前微透析采樣技術用于藥動學-藥效學結合研究還存在著一些明顯的技術局限。其中，最主要的問題包括：微透析技術用于藥動學-藥效學結合研究大多基于動物麻醉狀態；另外，大多研究采用的是微透析采樣與血液采集相結合的方法分別用于開展藥動學和(或)藥效學研究。有研究表明動物麻醉以及動物血液量的損失會顯著地影響藥物的藥動學和藥效學行為。

發明內容

為了解決以上問題，本發明建立了一種清醒大鼠在體微透析采樣技術用于采集異丙腎上腺素(ISO)誘導的心肌缺血大鼠給藥生脈注射液后的血液透析液，并建立了高效液相色譜-三重四級桿質譜方法(HPLC-MS/MS)和高效液相色譜-熒光檢測技術(HPLC-FLU)分別用于測定透析液中的多成分藥物濃度和藥效指標NO的變化。所建立的方法無需采取大鼠血液，只采集大鼠血液透析液，同時用于測定藥物濃度和藥效指標的變化。

本發明的第一方面，提供一種清醒大鼠在體微透析采樣技術，具體步驟如下：手術前，大鼠腹腔注射5％水合氯醛生理鹽水溶液(0.25g/kg體重)，保持在整個手術過程大鼠處于麻醉狀態。手術過程采用體溫維持儀控制大鼠體溫為37℃。施行靜脈分離手術，暴露右側外頸靜脈，在外頸靜脈與腋靜脈交叉處上游約10mm處用手術剪在血管上表面剪出一小口，迅速將事先浸潤肝素鈉溶液的同軸型探針向心房方向插入血管中，用絲線將探針與血管固定在一起，防止探針滑脫(見圖1)。在大鼠頸背部開一小口，將探針的進出口端導管在穿刺針引導下沿皮下從頸背部引出，再用醫用手術縫合針線縫合各傷口，并擦上醫用碘酒消毒。最后將大鼠置于清醒裝置中，并聯接上微透析系統各導管，開通微量注射泵以2μL/min流速灌流生理鹽水溶液。恢復約12h后，大鼠可自由活動。