[發明專利]一種血液透析液檢測方法及其在生脈注射液藥動學-藥效學中的應用

有效

• 申請號: 201810036694.2
• 申請日: 2018-01-15
• 公開（公告）號: CN108362807B
• 公開（公告）日: 2021-02-19
• 發明（設計）人: 詹淑玉;邵青;丁寶月;阮鈺爾;黃嬛;黃雄;劉國強;呂曉慶;姜寧華
• 申請（專利權）人: 嘉興學院
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N30/06;G01N30/74
• 代理公司: 北京東方盛凡知識產權代理事務所(普通合伙) 11562
• 代理人: 張換君

1.一種給藥生脈注射液后的血液透析液檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：采用高效液相色譜-三重四級桿質譜方法分析血液透析液中的活性成分血藥濃度，并采用高效液相色譜-熒光檢測技術測定血液透析液中藥效指標NO；

其中，所述的血液透析液為通過微透析采樣得到的血液透析液，采集方法如下：模型大鼠頸靜脈埋植微透析探針后，被置于清醒動物裝置中；向清醒恢復的大鼠尾靜脈注射給藥生脈注射液后，自第5min開始，按每15min收集一份透析液，每份30μL，收集至12h止；

所述的活性成分為人參皂苷Rg1、人參皂苷Rg2、人參皂苷Re、人參皂苷Rf、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rd和人參皂苷Rc；所述的藥效指標NO通過測定透析液中NO₂^－和NO₃^－總含量獲得；

檢測所述的血液透析液中活性成分的血藥濃度時，采用Agilent1200液相色譜儀，和API4000三重四級桿質譜聯用儀；具體方法包括：精密量取透析液15μL于微量襯管中，加入15μL濃度為500ng/mL的地高辛甲醇內標溶液，渦旋混合10sec后直接進樣分析；

色譜條件：色譜柱Waters Xbridge C18柱，2.1mm×50mm，3.5μm，流動相A相為0.05％醋酸水溶液，流動相B相為0.05％醋酸乙腈，線性洗脫梯度：0min 20％B，6min 30％B，10min50％B，14min 62％B，15min 20％B，21min 20％B；流速0.5mL·min^-1，柱溫40℃，進樣量20μL；

質譜條件：電噴霧離子源，多重反應離子監測模式，采樣間隔200.0msec，碰撞氣：10psi，氣簾氣：10psi，霧化氣：40psi，輔助氣：50psi，離子源溫度：650℃，正離子模式離子源電壓：4500V；

所述的質譜條件中，人參皂苷Rg1、Rg2、Re、Rf、Rb1、Rd、Rc和內標的參數去簇電壓分別為120、140、140、120、140、140、140和60V，入口電壓分別為15、15、9、15、9、9、13和7V，碰撞能量分別為50、70、70、70、90、70、70和50V，出口電壓分別為10、20、20、20、20、20、20和10V；

在檢測得到所述的活性成分血藥濃度和藥效指標NO后，繪制給藥生脈注射液后活性成分血藥濃度-時間曲線圖和藥效-時間曲線圖；根據血藥濃度-時間關系和藥效-時間關系建立藥動學-藥效學結合模型。

2.根據權利要求1所述的給藥生脈注射液后的血液透析液檢測方法，其特征在于，所述的血液透析液為異丙腎上腺素誘導的心肌缺血模型大鼠給藥生脈注射液后的血液透析液。

3.根據權利要求1所述的給藥生脈注射液后的血液透析液檢測方法，其特征在于，所述的血液透析液通過CMA微透析儀和MAB 7同軸型微透析探針收集。

4.根據權利要求1所述的給藥生脈注射液后的血液透析液檢測方法，其特征在于，所述的血液透析液中NO₂^－和NO₃⁺總含量測定的色譜條件：

Waters2695HPLC液相色譜儀，配Waters2475熒光檢測器；色譜柱為Waters XBridgeC18柱，2.1×50mm,3.5μm；流動相為體積比為85：15的20mM Na₂HPO₄水溶液-乙腈，所述的Na₂HPO₄水溶液的pH為10；流速：0.3mL/min，柱溫30℃，進樣量10μL；熒光檢測激發波長355nm，發射波長460nm。

5.根據權利要求1所述的給藥生脈注射液后的血液透析液檢測方法，其特征在于，所述的血液透析液中NO₂^－和NO₃^－總含量測定方法包括：精密量取透析液10μL于0.6mL聚丙烯管中，分別加入10μL濃度為1mM的NADPH溶液、10μL濃度為1mM的FAD溶液和40μL濃度為1U/mL的硝酸鹽還原酶溶液；渦旋混勻5s后放置于室溫下避光孵育40min，再加入20μL濃度為50U/mL的LDH溶液，再渦旋混勻5s后于室溫下避光孵育20min，目的是去除體系中未反應完的NADPH，隨后在反應完的樣品中加入150μL去離子水，渦旋混勻5s后，加入20μL濃度為316μM的DAN溶液，在25℃條件下孵育30min后加入20μL濃度為1.4M的NaOH溶液，混勻后10,000rpm離心5min，取上清液直接進樣分析。