[發(fā)明專利]一種抗牛早孕因子單克隆抗體細(xì)胞株單克隆抗體的制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810036346.5
• 申請(qǐng)日: 2018-01-15
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108314732A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-07-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陸建;鄭慶豐;信維力
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 妊達(dá)（北京）生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C07K16/18
• 分類號(hào): C07K16/18;C07K1/22;C12N5/20;G01N33/68;G01N33/577;C12R1/91
• 代理公司: 北京紐樂(lè)康知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11210
• 代理人: 史靜

1.一種抗牛早孕因子單克隆抗體細(xì)胞株單克隆抗體的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1建立抗牛早孕因子單克隆抗體細(xì)胞株：通過(guò)表位預(yù)測(cè)獲得抗原表位免疫多肽，與載體KLH交聯(lián)，免疫小鼠獲得抗血清并測(cè)定效價(jià)，SP2/0細(xì)胞與小鼠脾細(xì)胞融合，細(xì)胞克隆獲得能穩(wěn)定傳代并分泌抗牛早孕單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞，篩選陽(yáng)性克隆；

S2制備單克隆抗體：收集S1建立的抗牛早孕因子單克隆抗體細(xì)胞株陽(yáng)性克隆，對(duì)小鼠進(jìn)行腹腔注射，收集腹水，去細(xì)胞、除雜，澄清處理，應(yīng)用Protein G層析柱對(duì)單克隆抗體進(jìn)行親和純化。

2.如權(quán)利要求1所述的一種抗牛早孕因子單克隆抗體細(xì)胞株單克隆抗體的制備方法，其特征在于，所述的抗牛早孕因子單克隆抗體細(xì)胞株的建立，通過(guò)表位預(yù)測(cè)獲得5段抗原表位序列，分別為：SEQ NO.2，SEQ NO.3，SEQ NO.4，SEQ NO.5，SEQ NO.6。

3.如權(quán)利要求2所述的一種抗牛早孕因子單克隆抗體細(xì)胞株單克隆抗體的制備方法，其特征在于，所述的5段抗原表位序列N-端或C-端添加一個(gè)半胱氨酸，與載體KLH交聯(lián)。

4.如權(quán)利要求1所述的一種抗牛早孕因子單克隆抗體細(xì)胞株單克隆抗體的制備方法，其特征在于，對(duì)構(gòu)建的單克隆抗體細(xì)胞株進(jìn)行雜交瘤細(xì)胞亞型檢測(cè)，采用5段多肽分別檢測(cè)，以確認(rèn)雜交瘤細(xì)胞株的識(shí)別表位。

5.如權(quán)利要求1所述的一種抗牛早孕因子單克隆抗體細(xì)胞株單克隆抗體的制備方法，其特征在于，將制備的單克隆抗體與HRP交聯(lián)形成酶結(jié)合物。

6.如權(quán)利要求1所述的一種抗牛早孕因子單克隆抗體細(xì)胞株單克隆抗體的制備方法，其特征在于，采用棋盤(pán)法將不同多肽免疫的單克隆抗體交叉做捕獲抗體或檢測(cè)抗體，評(píng)價(jià)它們檢測(cè)牛早孕因子蛋白的可能性。