[發明專利]一種抗牛早孕因子單克隆抗體細胞株單克隆抗體的制備方法在審
| 申請號： | 201810036346.5 | 申請日： | 2018-01-15 |
| 公開（公告）號： | CN108314732A | 公開（公告）日： | 2018-07-24 |
| 發明（設計）人： | 陸建;鄭慶豐;信維力 | 申請（專利權）人： | 妊達（北京）生物技術有限公司 |
| 主分類號： | C07K16/18 | 分類號： | C07K16/18;C07K1/22;C12N5/20;G01N33/68;G01N33/577;C12R1/91 |
| 代理公司： | 北京紐樂康知識產權代理事務所(普通合伙) 11210 | 代理人： | 史靜 |
| 地址： | 100096 北京市昌平區回龍*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 早孕因子 單克隆抗體細胞株 單克隆抗體 制備 雜交瘤細胞 腹水單克隆抗體 陽性雜交瘤細胞 傳代 偶聯載體蛋白 鼠骨髓瘤細胞 雜交瘤技術 腹腔注射 合成抗體 快速檢測 偶聯產物 位點序列 細胞克隆 早期妊娠 脾細胞 多肽 構建 早孕 分泌 篩選 融合 服務 | ||
1.一種抗牛早孕因子單克隆抗體細胞株單克隆抗體的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
S1建立抗牛早孕因子單克隆抗體細胞株：通過表位預測獲得抗原表位免疫多肽，與載體KLH交聯，免疫小鼠獲得抗血清并測定效價，SP2/0細胞與小鼠脾細胞融合，細胞克隆獲得能穩定傳代并分泌抗牛早孕單克隆抗體的雜交瘤細胞，篩選陽性克隆；
S2制備單克隆抗體：收集S1建立的抗牛早孕因子單克隆抗體細胞株陽性克隆，對小鼠進行腹腔注射，收集腹水，去細胞、除雜，澄清處理，應用Protein G層析柱對單克隆抗體進行親和純化。
2.如權利要求1所述的一種抗牛早孕因子單克隆抗體細胞株單克隆抗體的制備方法，其特征在于，所述的抗牛早孕因子單克隆抗體細胞株的建立，通過表位預測獲得5段抗原表位序列，分別為：SEQ NO.2，SEQ NO.3，SEQ NO.4，SEQ NO.5，SEQ NO.6。
3.如權利要求2所述的一種抗牛早孕因子單克隆抗體細胞株單克隆抗體的制備方法，其特征在于，所述的5段抗原表位序列N-端或C-端添加一個半胱氨酸，與載體KLH交聯。
4.如權利要求1所述的一種抗牛早孕因子單克隆抗體細胞株單克隆抗體的制備方法，其特征在于，對構建的單克隆抗體細胞株進行雜交瘤細胞亞型檢測，采用5段多肽分別檢測，以確認雜交瘤細胞株的識別表位。
5.如權利要求1所述的一種抗牛早孕因子單克隆抗體細胞株單克隆抗體的制備方法，其特征在于，將制備的單克隆抗體與HRP交聯形成酶結合物。
6.如權利要求1所述的一種抗牛早孕因子單克隆抗體細胞株單克隆抗體的制備方法，其特征在于，采用棋盤法將不同多肽免疫的單克隆抗體交叉做捕獲抗體或檢測抗體，評價它們檢測牛早孕因子蛋白的可能性。
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