[發明專利]一種高產胞外多糖菌株及其多糖分離純化方法在審
| 申請號： | 201810036104.6 | 申請日： | 2018-01-15 |
| 公開（公告）號： | CN108034612A | 公開（公告）日： | 2018-05-15 |
| 發明（設計）人： | 周志江;馮芳;韓燁;肖華志 | 申請（專利權）人： | 天津大學 |
| 主分類號： | C12N1/20 | 分類號： | C12N1/20;C12P19/04;C08B37/00;C12R1/01 |
| 代理公司： | 天津市北洋有限責任專利代理事務所 12201 | 代理人： | 琪琛 |
| 地址： | 300350 天津市津南區海*** | 國省代碼： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 高產 多糖 菌株 及其 分離 純化 方法 | ||
1.一種高產胞外多糖菌株，其為檸檬明串珠菌(Leuconstoc citreum)B-2，于2017年12月04日保藏至中國普通微生物菌種保藏管理中心，保藏編號為CGMCC No.15014。
2.一種高產胞外多糖菌株胞外多糖的分離純化方法，其特征在于，采取如權利要求1所述的胞外多糖菌株，包括以下步驟：
(1)將檸檬明串珠菌(Leuconstoc citreum)B-2接種于產糖發酵培養基中培養得到發酵液，將發酵液進行低溫高速離心，去除菌體，取上清；
(2)將離心去除菌體后的上清用乙醇沉淀，靜置，離心，取沉淀；
(3)將沉淀溶解于蒸餾水中，在溶液中加入三氯乙酸溶液以沉淀蛋白質，連續攪拌，離心，取上清液；
(4)將上清液用乙醇沉淀，靜置，離心，取沉淀；
(5)將沉淀再溶解于蒸餾水中，進行透析，得到粗多糖溶液；
(6)將粗多糖進行凝膠柱層析，得到純胞外多糖。
3.根據權利要求2所述的一種高產胞外多糖菌株的多糖分離純化方法，其特征在于步驟(1)所述離心溫度為4℃，離心時間為30～40min，離心轉速為4000rpm。
4.根據權利要求2所述的一種高產胞外多糖菌株的多糖分離純化方法，其特征在于步驟(2)所述乙醇濃度為95％，預冷溫度為-20℃，乙醇:發酵液＝3:1，靜置時間為12～24h，離心溫度為4℃，離心時間為50～60min，離心轉速為12000rpm。
5.根據權利要求2所述的一種高產胞外多糖菌株的多糖分離純化方法，其特征在于步驟(3)中所述加入80％三氯乙酸溶液至終濃度為5％，連續攪拌3～4h，離心溫度為4℃，離心時間為50～60min，離心轉速為12000rpm。
6.根據權利要求2所述的一種高產胞外多糖菌株的多糖分離純化方法，其特征在于步驟(4)中所述乙醇濃度為95％，預冷溫度為-20℃，乙醇:上清液＝3:1，靜置12h，離心溫度為4℃，離心時間為50～60min，離心轉速為12000rpm。
7.根據權利要求2所述的一種高產胞外多糖菌株的多糖分離純化方法，其特征在于步驟(5)中所述透析為于4℃冰箱透析48h，每8h換水一次。
8.根據權利要求2所述的一種高產胞外多糖菌株的多糖分離純化方法，其特征在于所述步驟(6)中所述采用葡聚糖凝膠G-100過濾層析對多糖進行純化。
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