[發(fā)明專利]一種高產(chǎn)胞外多糖菌株及其多糖分離純化方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201810036104.6 | 申請日： | 2018-01-15 |
| 公開（公告）號： | CN108034612A | 公開（公告）日： | 2018-05-15 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 周志江;馮芳;韓燁;肖華志 | 申請（專利權(quán)）人： | 天津大學(xué) |
| 主分類號： | C12N1/20 | 分類號： | C12N1/20;C12P19/04;C08B37/00;C12R1/01 |
| 代理公司： | 天津市北洋有限責(zé)任專利代理事務(wù)所 12201 | 代理人： | 琪琛 |
| 地址： | 300350 天津市津南區(qū)海*** | 國省代碼： | 天津;12 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 高產(chǎn) 多糖 菌株 及其 分離 純化 方法 | ||
本發(fā)明公開了一種高產(chǎn)胞外多糖菌株及其多糖分離純化方法。該菌株命名為檸檬明串珠菌(Leuconstoc citreum)B?2，于2017年12月04日保藏至中國普通微生物菌種保藏管理中心，保藏編號為CGMCC No.15014。本發(fā)明從菠蘿自然發(fā)酵液中分離篩選出一株高產(chǎn)胞外多糖的乳酸菌，經(jīng)鑒定為檸檬明串珠菌(Leuconstoc citreum)。將檸檬明串珠菌(Leuconstoc citreum)B?2接種于產(chǎn)糖發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)得到發(fā)酵液，離心去除菌體，用乙醇沉淀，獲得粗多糖；將粗多糖進(jìn)行純化，即得胞外多糖。經(jīng)結(jié)構(gòu)性質(zhì)測定，該多糖為葡聚糖，呈高度分支結(jié)構(gòu)。這種純化方法純度好、產(chǎn)糖量高、操作簡便。本發(fā)明用于產(chǎn)胞外多糖。本發(fā)明技術(shù)方案拓展了產(chǎn)胞外多糖的微生物菌種來源，并提供了一種乳酸菌產(chǎn)胞外多糖純化的新方法。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及一種高產(chǎn)胞外多糖菌株及其多糖分離純化方法。
背景技術(shù)
胞外多糖(exopolysaccharide,EPS)是微生物(如細(xì)菌、酵母、真菌)在生長過程中分泌到細(xì)胞外的粘液或莢膜多糖。在眾多產(chǎn)胞外多糖的微生物中，乳酸菌(lactic acidbacteria,LAB)具有發(fā)酵周期短、營養(yǎng)要求簡單等優(yōu)越性，成為微生物胞外多糖的理想來源。乳酸菌胞外多糖已作為穩(wěn)定劑、增稠劑被用于酸奶、奶酪等發(fā)酵奶制品的生產(chǎn)中。此外，乳酸菌胞外多糖還有降低膽固醇、抗氧化、抗腫瘤、對消化道的調(diào)節(jié)等作用。與其他多糖相比，乳酸菌胞外多糖的研究更具有實(shí)際價(jià)值，乳酸菌生長極為迅速，它的胞外多糖提取工藝更簡單，安全性較高、價(jià)格便宜，比其他微生物多糖更適用于人類。因此，挖掘自然界中豐富的乳酸菌資源，發(fā)現(xiàn)高產(chǎn)胞外多糖的乳酸菌細(xì)菌菌株，以短周期、低成本獲得更多的胞外多糖，一直是微生物學(xué)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。
此前，有研究者為得到純的胞外多糖，采用固體培養(yǎng)基，直接從培養(yǎng)基表面提取胞外多糖，此法對操作者要求高，且培養(yǎng)基不能被充分利用，產(chǎn)糖量很低，造成成本浪費(fèi)。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了拓展產(chǎn)胞外多糖的微生物菌種來源，提供一種乳酸菌胞外多糖的分離純化新方法。
所述胞外多糖菌株為檸檬明串珠菌(Leuconstoc citreum)B-2，已于2017年12月04日保藏于中國普通微生物菌種保藏管理中心(北京市朝陽區(qū)北辰路1號院3號中國科學(xué)院微生物研究所)，保藏編號為CGMCC No.15014。該菌株經(jīng)16S rRNA基因測序的結(jié)果見序列表SEQ ID NO:1。
所述高產(chǎn)胞外多糖菌株為革蘭氏陽性細(xì)菌，不產(chǎn)芽孢和鞭毛，兼性厭氧，能以多種糖類為碳源進(jìn)行乳酸發(fā)酵。菌落為圓形，不透明，灰白色，邊緣整齊，略突起，正反面顏色一致，中央與邊緣顏色一致。發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，接觸酶陰性，不水解精氨酸，不產(chǎn)吲哚。微生物生理生化試驗(yàn)說明具有明串株菌屬(Leuconostoc)的特性。
本發(fā)明胞外多糖分離純化方法，按以下步驟進(jìn)行：
1)將檸檬明串珠菌(Leuconstoc citreum)B-2接種于產(chǎn)糖發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)得到發(fā)酵液。將發(fā)酵液進(jìn)行低溫高速離心，去除菌體，取上清。
2)將離心去除菌體后的上清用乙醇沉淀，靜置，離心，取沉淀。
3)將沉淀溶解于蒸餾水中，在溶液中加入三氯乙酸溶液以沉淀蛋白質(zhì)，連續(xù)攪拌，離心，取上清液。
4)將上清液用乙醇沉淀，靜置，離心，取沉淀。
5)將沉淀再溶解于蒸餾水中，進(jìn)行透析，得到粗多糖溶液。
6)將粗多糖進(jìn)行凝膠柱層析，得到純胞外多糖。
在步驟1)中，所述離心溫度為4℃，離心時(shí)間為30～40min，離心轉(zhuǎn)速為4000rpm。
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