[發(fā)明專利]基于香豆素骨架的Wittig試劑及其制備方法和用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810035548.8
• 申請日: 2018-01-15
• 公開（公告）號: CN108530483B
• 公開（公告）日: 2020-07-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 余孝其;李坤;周倩
• 申請（專利權(quán)）人: 四川大學(xué)
• 主分類號: C07F9/655
• 分類號: C07F9/655;C09K11/06;G01N21/64
• 代理公司: 成都點睛專利代理事務(wù)所(普通合伙) 51232
• 代理人: 李玉興

本發(fā)明屬于生物化學(xué)領(lǐng)域，主要涉及基于香豆素骨架的Wittig試劑及其制備方法和用途。本發(fā)明為基于香豆素骨架改良的Wittig試劑，其結(jié)構(gòu)式如式Ⅰ所示。除此之外，本發(fā)明還提供了該化合物的制備方法及其在核酸檢測方面的用途。本發(fā)明設(shè)計的基于香豆素骨架的Wittig試劑有效結(jié)合熒光傳感技術(shù)和傳統(tǒng)的Wittig反應(yīng)實現(xiàn)了對5?醛基尿嘧啶(5fU)的高靈敏度、高選擇性檢測，同時該試劑合成路線簡潔，反應(yīng)條件溫和，原料經(jīng)濟易得，為現(xiàn)有反應(yīng)型5?醛基尿嘧啶(5fU)熒光探針的設(shè)計提供了新思路。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及基于香豆素骨架的Wittig試劑及其制備方法和用途。

背景技術(shù)

DNA損傷在細(xì)胞內(nèi)普遍存在^[1]。5-醛基尿嘧啶(5fU)是一種與8-羥基脫氧鳥苷(8-oxodGuo)含量相當(dāng)?shù)腄NA氧化損傷，由胸腺嘧啶(T)經(jīng)系列氧化過程所得^[2]。細(xì)胞內(nèi)源性的活性氧(ROS)，外源性的紫外輻射、離子輻射、芬頓試劑等均會使細(xì)胞內(nèi)的5fU含量升高。與C-5位為甲基的胸腺嘧啶相比，C-5位為醛基的5-醛基尿嘧啶(5fU)其N-3位酸性明顯增強，容易去質(zhì)子以離子化形式存在，此離子化形式在DNA復(fù)制過程中易與G、C、T形成錯配，造成基因突變；此外，活潑的醛基易與含氨基、巰基的化合物偶聯(lián)引入新的堿基修飾損傷，進而干擾DNA的正常功能，甚至引發(fā)重大疾病^[3]。

綜上所述，開發(fā)高選擇性、高靈敏度的檢測技術(shù)以準(zhǔn)確測定DNA中的5-醛基尿嘧啶(5fU)水平具有重要意義。

目前，色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技^[4]被廣泛應(yīng)用于檢測DNA氧化損傷，但此法包含復(fù)雜繁瑣的樣品前處理過程，而且依賴于昂貴的大型分析儀器。相比之下，熒光傳感技術(shù)具有操作簡單、成本低廉、靈敏度高、選擇性好等優(yōu)勢，受到了眾多科研工作者的青睞。近年來，針對5-醛基尿嘧啶(5fU)的C-5位醛基，各種反應(yīng)型小分子熒光探針相繼被開發(fā)。他們大多為鄰氨基苯硫酚、鄰苯二胺、肼、吲哚等的衍生物，可選擇性與醛基反應(yīng)生成相應(yīng)的苯丙噻唑、苯丙咪唑、C＝N、C＝C等共軛結(jié)構(gòu)，實現(xiàn)對5-醛基尿嘧啶(5fU)的熒光識別^[5]。盡管探針結(jié)構(gòu)千變?nèi)f化，但反應(yīng)類型僅僅局限于席夫堿反應(yīng)或類似Adol反應(yīng)(羥醛縮合/醇醛縮合反應(yīng))，因此，基于其他有機化學(xué)原理開發(fā)新的醛基化試劑以擴充5-醛基尿嘧啶(5fU)的熒光探針分子庫是及其重要且必要的。

Wittig反應(yīng)(葉立德反應(yīng))是德國化學(xué)家G.Wittig于1953年發(fā)現(xiàn)的，主要用于醛、酮直接合成烯烴。該方法具有收率高、反應(yīng)條件溫和、選擇性好等優(yōu)點，為此，G.Wittig獲得了1979年的諾貝爾化學(xué)獎。香豆素是一種經(jīng)濟易得的化學(xué)原料，鑒于其優(yōu)異的熒光性質(zhì)及豐富的衍生手段，在化學(xué)生物學(xué)領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用。截至目前，基于香豆素骨架改良傳統(tǒng)的Wittig試劑構(gòu)建比率型熒光探針，并將其應(yīng)用于DNA中5-醛基尿嘧啶(5fU)的選擇性識別與定量檢測仍然是一個空白，而我們的設(shè)計擬將填補這個空白。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了一種基于香豆素骨架的Wittig試劑，用于DNA中5-醛基尿嘧啶(5fU)的檢測。所述基于香豆素骨架的Wittig試劑的結(jié)構(gòu)如式Ⅰ所示：

其中，R為或-NH₂；R₁～R₃獨立地為C1～C8烷基。

作為本發(fā)明優(yōu)選的方案，R為或-NH₂；R₁～R₃獨立地為C1～C8烷基；

進一步優(yōu)選，R為或-NH₂；R₁～R₃獨立地為C1～C4烷基；

更進一步優(yōu)選，R為R₁～R₃獨立地為C1～C4烷基；