[發明專利]一種定量檢測血清淀粉樣蛋白A的試劑盒及制備方法

在審

• 申請號: 201810034547.1
• 申請日: 2018-01-15
• 公開（公告）號: CN108169219A
• 公開（公告）日: 2018-06-15
• 發明（設計）人: 胡國富;朱炎
• 申請（專利權）人: 浙江艾明德生物科技有限公司
• 主分類號: G01N21/76
• 分類號: G01N21/76;G01N33/68;G01N33/577
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種定量檢測血清淀粉樣蛋白A的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括：辣根過氧化物酶標記的血清淀粉樣蛋白A的單克隆抗體、包被有血清淀粉樣蛋白A的單克隆抗體的載體、血清淀粉樣蛋白A校準品和上述辣根過氧化物酶所作用的化學發光底物。

2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述載體為固相載體、磁性微粒、微孔板、塑料管或塑料珠。

3.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述化學發光底物為過氧化脲、過氧化氫、過氧化二苯甲酰和過氧化二異丙苯。

4.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述化學發光底物液包括A液和B液，A液包括2g/L的魯米諾、0.16g/L的鄰苯基苯酚和0.2M pH 7.4的Tris-HCl緩沖液；B液包括0.6g/L的過氧化脲和0.2M pH 7.4的Tris-HCl緩沖液。

5.一種制備權利要求1所述試劑盒的方法，其特征在于包括以下步驟：

（1）用辣根過氧化物酶標記血清淀粉樣蛋白A的單克隆抗體；

（2）以血清淀粉樣蛋白A的單克隆抗體包被載體；

（3）以血清淀粉樣蛋白A純品配制血清淀粉樣蛋白A校準品；

（4）分裝上述血清淀粉樣蛋白A校準品、辣根過氧化物酶標記的血清淀粉樣蛋白A的單克隆抗體和該辣根過氧化物酶所作用的化學發光底物；

（5）組裝為成品。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述用辣根過氧化物酶標記血清淀粉樣蛋白A的單克隆抗體包括以下過程：

（1）稱取5mg 辣根過氧化物酶，溶解于1ml蒸餾水中，形成濃度為5mg/ml的辣根過氧化物酶溶液；

（2）往辣根過氧化物酶溶液中加入0.2ml的0.1M NaIO₄溶液，室溫下避光攪拌30分鐘；

（3）將溶液裝入透析袋中，1mM pH 4.4的醋酸鈉緩沖液進行透析，在2-8℃下過夜，獲得透析后的醛化辣根過氧化物酶溶液；

（4）加入20μl 0.2M pH 9.5的碳酸鈉緩沖液，調節醛化辣根過氧化物酶溶液的pH至9.0～9.5，加入含10mg 抗血清淀粉樣蛋白A抗體的1ml 0.01M碳酸鹽緩沖液，室溫避光輕輕攪拌2小時；

（5）加入0.1ml 4mg/ml NaBH₄溶液，混勻，在2-8℃下放置2小時；

（6）溶液裝入透析袋中，在2-8℃下0.05M pH 7.4的磷酸鹽緩沖液透析過夜；中間換兩次透析液；

（7）將透析袋中溶液移入到5mL玻璃瓶中，加入等體積的甘油，獲得辣根過氧化物酶標記血清淀粉樣蛋白A抗體溶液備用。

7.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述以血清淀粉樣蛋白A的單克隆抗體包被載體包括以下過程：

（1）用含2μg/mL血清淀粉樣蛋白A的0.05M pH 4.6檸檬酸鹽緩沖液加入到微孔板中，110μL/孔，2-8℃包被20-24小時，棄去孔內液體，用磷酸鹽吐溫緩沖液洗液洗板三次；

（2）用含質量比的2%的水解明膠，質量比2.5%的蔗糖，0.05M pH 7.4的磷酸鹽緩沖液，按200μL/孔、2-8℃封閉18-24小時后，棄去孔內液體；

（3）放入37℃恒溫箱中干燥16-28小時，用封口袋封口后，2-8℃存放。

8.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述血清淀粉樣蛋白A純品配制血清淀粉樣蛋白A校準品包括以下過程：用血清淀粉樣蛋白A純品配制，稀釋液稀釋，分裝為0.5mL/瓶，濃度為 0、5、20、60、200、600ng/mL，共6瓶，2-8℃保存。

9.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述血清淀粉樣蛋白A得包被濃度為2.0μg/mL。

10.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述血清淀粉樣蛋白A包被緩沖液為0.05M pH 4.6檸檬酸鹽緩沖液、0.05M pH 4.6檸檬酸鹽緩沖液、0.05M pH 7.5磷酸鹽緩沖液或0.05M pH 9.6碳酸鹽緩沖液。