[發明專利]一種定量檢測血清淀粉樣蛋白A的試劑盒及制備方法

在審

• 申請號: 201810034547.1
• 申請日: 2018-01-15
• 公開（公告）號: CN108169219A
• 公開（公告）日: 2018-06-15
• 發明（設計）人: 胡國富;朱炎
• 申請（專利權）人: 浙江艾明德生物科技有限公司
• 主分類號: G01N21/76
• 分類號: G01N21/76;G01N33/68;G01N33/577
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明提供了一種定量檢測血清淀粉樣蛋白A的試劑盒，試劑盒包括：辣根過氧化物酶標記的血清淀粉樣蛋白A的單克隆抗體；包被有血清淀粉樣蛋白A的單克隆抗體的載體；血清淀粉樣蛋白A校準品；化學發光底物。同時，試劑盒的制備方法包括：用辣根過氧化物酶標記血清淀粉樣蛋白A的單克隆抗體；以血清淀粉樣蛋白A的單克隆抗體包被載體；以血清淀粉樣蛋白A純品配制血清淀粉樣蛋白A校準品；分裝上述血清淀粉樣蛋白A校準品、辣根過氧化物酶標記的血清淀粉樣蛋白A的單克隆抗體和該HRP所作用的化學發光底物；組裝為成品。本發明的試劑盒靈敏度高，特異性好，定量檢測結果準確度高，使用成本低，更易推廣應用。

本發明涉及生物醫學領域，特別涉及一種定量檢測血清淀粉樣蛋白A的試劑盒及制備方法。

背景技術

血清淀粉樣蛋白A（serum amyloid A，SAA)是一種急性時限反應蛋白，屬于載脂蛋白家族中的異質類蛋白質，相對分子量約12000。在急性時限反應中，經IL-1、IL-6和TNF刺激，SAA在肝臟中由被激活的巨噬細胞和纖維母細胞合成，可升高到最初濃度的100-1000倍，但半衰期極短，只有50分鐘左右。血清淀粉樣蛋白A與高密度脂蛋白 (HDL)有關，它能在炎癥期間調節高密度脂蛋白的代謝。血清淀粉樣蛋白A一個特別重要的特性是其降解產物能以淀粉樣蛋白A (AA) 原纖維的方式沉積在不同的器官中，在慢性炎癥疾病中這是一種嚴重的并發癥。

與 C 反應蛋白 (CRP) 類似，血清淀粉樣蛋白A的含量濃度是反映感染性疾病早期炎癥的敏感指標，有助于診斷炎癥、評估其活性、監控其活動及治療。但是，血清淀粉樣蛋白 A 檢測在診斷發生病毒感染、腎移植排斥反應的患者（特別是進行免疫抑制治療的患者）以及用腎上腺皮質激素治療的囊性纖維化患者方面，比 C 反應蛋白更確鑿。研究發現，在炎性關節炎的案例中，血清淀粉樣蛋白A與疾病活動性的關系密切。同時檢測 C 反應蛋白和血清淀粉樣蛋白 A 能提高對感染的診斷靈敏度。對于淀粉樣蛋白A 淀粉樣變性患者，以將血清淀粉樣蛋白 A 水平回復至正常為宗旨的治療，能改善病情。

現有技術檢測血清學指標的方法主要包括放射性同位素免疫分析、生化免疫比濁的方法分析、膠體金免疫層析法和酶聯免疫吸附方法。放射免疫分析須用¹²⁵I等放射性元素標記，檢測設備復雜，其放射性核素的半衰期短，不能長期保存，測定結果不穩定，同時也給實驗操作人員帶來了放射性傷害。免疫比濁的方法，該方法檢測靈敏度低，溶液受環境的影響。膠體金免疫層析法來檢測，快速，便捷，單人份操作，但是缺點是只能實現半定量，只能指示一個大概范圍，無法實現精確定量。酶聯免疫分析檢測靈敏度不夠高，檢測范圍窄，影響因素較多，易造成假陰性和假陽性。

發明內容

本方案通過提供一種定量檢測血清淀粉樣蛋白A的化學發光檢測試劑及制備方法，解決現有技術的檢測靈敏度低，特異性差，檢測范圍窄的缺點。本發明研制的血清淀粉樣蛋白A測定試劑（化學發光免疫分析法）采用的是雙抗體夾心的反應模式，使免疫標記和有關示蹤分析更加靈敏，血清淀粉樣蛋白A特異性的單克隆抗體純度高、無傳染性，非特異結合反應小，可以大批量生產，同時本發明的試劑盒靈敏度高，特異性好，定量檢測結果準確度高，更易推廣應用。

一方面，本發明提供了一種定量檢測血清淀粉樣蛋白A的試劑盒，本發明的試劑盒包括：

（1）辣根過氧化物酶（HRP）標記的血清淀粉樣蛋白A的單克隆抗體；

（2）包被有血清淀粉樣蛋白A的單克隆抗體的載體；

（3）血清淀粉樣蛋白A校準品；

（4）上述辣根過氧化物酶所作用的化學發光底物。

另一方面，本發明提供了一種定量檢測血清淀粉樣蛋白A的試劑的制備方法，該方法包括：

（1）用辣根過氧化物酶標記血清淀粉樣蛋白A的單克隆抗體；

（2）以血清淀粉樣蛋白A的單克隆抗體包被載體；