[發(fā)明專利]一種脊髓灰質(zhì)炎病毒Ⅰ型D抗原預(yù)包被檢測方法及其檢測試劑盒和應(yīng)用

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201810032964.2
• 申請日: 2018-01-13
• 公開（公告）號: CN108303533A
• 公開（公告）日: 2018-07-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 謝忠平;龍潤?quán)l(xiāng);楊蓉;羅芳宇;陳洪波;楊婷;李華;岳磊;謝天宏;王正鑫
• 申請（專利權(quán)）人: 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569
• 代理公司: 北京中政聯(lián)科專利代理事務(wù)所(普通合伙) 11489
• 代理人: 蘇杭

本發(fā)明提供一種預(yù)包被的可進行批量生產(chǎn)的脊髓灰質(zhì)炎病毒（Polio virus）Ⅰ型D抗原檢測方法，采用牛（兔、羊）抗Ⅰ型脊髓灰質(zhì)炎病毒D抗原純化抗體包被微孔板，并通過保護劑對包被板和包被抗體進行保護后制備成預(yù)包被板，同時配套辣根過氧化物酶標記的牛（兔、羊）抗Ⅰ型脊髓灰質(zhì)炎病毒酶標抗體和其他試劑。該方法（試劑）可以對脊髓灰質(zhì)炎病毒Ⅰ型D抗原進行特異性的定性和定量檢測，對脊髓灰質(zhì)炎病毒Ⅰ型C抗原，Ⅱ、Ⅲ型C、D抗原和其他腸道病毒無交叉，是一種特異性高、靈敏高，使用方便、用途廣泛的Ⅰ型脊髓灰質(zhì)炎病毒D抗原檢測法，在IPV疫苗生產(chǎn)檢定中有較高的應(yīng)用價值。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種脊髓灰質(zhì)炎病毒Ⅰ型D抗原預(yù)包被檢測方法及其檢測試劑盒和應(yīng)用。

背景技術(shù)

脊髓灰質(zhì)炎病毒(polio virus)屬于小核糖核酸病毒科、腸道病毒屬，分3個血清型，其主要侵犯脊髓前角灰質(zhì)區(qū)運動神經(jīng)元，臨床特征為弛緩性肌肉麻痹，多發(fā)生在5歲以下兒童，尤其是嬰幼兒，故亦稱小兒麻痹癥，是WHO繼天花之后要消滅的第二種傳染病的主要病原體。脊髓灰質(zhì)炎病毒感染后沒有特效的治療手段，只能通過疫苗進行預(yù)防，目前用于預(yù)防控制脊灰流行的疫苗有兩種：脊髓灰質(zhì)炎減毒活疫苗(OPV)和滅活脊髓灰質(zhì)炎疫苗(IPV) ，OPV因易于接種，成本相對較低而一度被廣泛使用，但在長期使用過程中發(fā)現(xiàn)，其可能引起脊灰疫苗相關(guān)麻痹(VAPP)病例和疫苗衍生株脊灰病毒VDPV) ，IPV則能有效避免VAPP和VDPV的發(fā)生。因此，徹底消滅脊灰病毒最終需要用IPV全部取代OPV進行預(yù)防控制。

脊髓灰質(zhì)炎病毒共有3個血清型，分別為PolioⅠ型、Polio Ⅱ型和Polio Ⅲ 型，3個型別的病毒顆粒均有2種形式，分別為具有感染性的完整病毒顆粒形式的D抗原和不具有感染性的空心顆粒C抗原。C抗原通過D抗原感染細胞過程、加熱、紫外線照射、堿變性、毒力降解而產(chǎn)生，其VP4消失而無感染性。 D抗原具有免疫原性，可誘導(dǎo)機體產(chǎn)生保護性中和抗體，從而預(yù)防脊髓灰質(zhì)炎的發(fā)生，而C抗原雖有組特異性，但免疫血清尚不能中和病毒，由于D抗原含量與滅活脊髓灰質(zhì)炎疫苗（IPV)接種后機體產(chǎn)生免疫效力之間具有較好的一致性，因此，D抗原作為IPV疫苗的主要成分抗原，其含量是IPV疫苗體外效力的關(guān)鍵指標，對IPV疫苗生產(chǎn)質(zhì)控具有重要意義。

D抗原檢測在IPV疫苗生產(chǎn)、質(zhì)量控制過程中時常用到，單價原液檢測、半成品配制、三價半成品檢測、成品檢定都有涉及脊灰病毒D抗原檢測的項目，由于D抗原含量是IPV疫苗質(zhì)量的一個重要標準，直接影響疫苗的保護效果，因此D抗原檢測方法的優(yōu)劣和便捷在一定程度上可以直接影響到疫苗的生產(chǎn)進程和質(zhì)量標準。

由于脊灰病毒抗體用于實驗后發(fā)現(xiàn)其包被微孔板穩(wěn)定性差，不能制備成預(yù)包被板成品，只能使用前包被，包被完畢需及時進行檢測，否則檢測結(jié)果會出現(xiàn)較大差異，因此目前市場上并沒有商售的脊灰病毒D抗原檢測試劑盒。現(xiàn)有的D抗原檢測方法（試劑）無法批量制備，每次使用前包被導(dǎo)致檢測周期長，至少3天才能完成一個檢測，并且對檢測人員的操作技能要求高，換操作人員即有可能導(dǎo)致人員操作偏差出現(xiàn)，不利于疫苗質(zhì)量的穩(wěn)定性。基于市場的需求和疫苗生產(chǎn)檢定的要求，申請人研發(fā)了一種可用于Ⅰ型IPV病毒D抗原定性或定量快速檢測的方法，可以進行預(yù)包被，批量生產(chǎn)，全部檢測時間從3天縮短為3.5小時，有效提高了疫苗的檢定工作效率和檢測結(jié)果的穩(wěn)定性。

發(fā)明內(nèi)容

基于上述現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷和不足，本發(fā)明旨在提供一種脊髓灰質(zhì)炎病毒（Polio virus）Ⅰ型D抗原檢測方法，該方法可以對脊髓灰質(zhì)炎病毒Ⅰ型D抗原進行高特異性的精準定性和定量檢測。本發(fā)明還提供了一種預(yù)包被的可以進行批量生產(chǎn)的脊髓灰質(zhì)炎病毒（Polio virus）Ⅰ型D抗原檢測試劑盒。

一方面，本發(fā)明提供的一種脊髓灰質(zhì)炎病毒Ⅰ型D抗原快速定性、定量檢測方法，用于非臨床疾病診斷治療和非健康狀況判斷用途，其特征在于，包括以下步驟：

S1、對動物抗Ⅰ型脊髓灰質(zhì)炎病毒抗體進行制備并純化，得動物抗Ⅰ型脊髓灰質(zhì)炎病毒D抗原的純化抗體；