[發(fā)明專利]一種檢測結(jié)核抗體的多重液相芯片在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201810030875.4 | 申請日: | 2018-01-12 |
| 公開(公告)號: | CN108241052A | 公開(公告)日: | 2018-07-03 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人: | 閆冀煥;史玲莉;楊燁;梁少軍;李云;田潔;慈穎;劉春曉;廉國勝;黃恩炯;王勝啟;沈軍;張苗;石順利;蘭景;李薇;付曉昀 | 申請(專利權(quán))人: | 河北國際旅行衛(wèi)生保健中心 |
| 主分類號: | G01N33/533 | 分類號: | G01N33/533;G01N33/558;G01N33/543 |
| 代理公司: | 長沙星耀專利事務(wù)所(普通合伙) 43205 | 代理人: | 許伯嚴(yán) |
| 地址: | 050091 河北*** | 國省代碼: | 河北;13 |
| 權(quán)利要求書: | 查看更多 | 說明書: | 查看更多 |
| 摘要: | |||
| 搜索關(guān)鍵詞: | 抗原 生物素化抗體 編碼微球 多重檢測 結(jié)核抗體 液相芯片 種檢測 生物素標(biāo)記 體系穩(wěn)定性 多重體系 檢測結(jié)果 融合蛋白 熒光微球 種試劑盒 抗人IgG 靈敏度 結(jié)核病 兔抗雞 陽性率 雞IgG 羧基 山羊 檢測 | ||
1.一種檢測結(jié)核抗體的多重液相芯片,其特征在于,包括抗原藕聯(lián)編碼微球和生物素化抗體,所述抗原藕聯(lián)編碼微球為將LAM、CFP-10、EAST-6、16KD、38KD、65KD和TBGL抗原、CFP10-EAST6和38KD-16KD融合蛋白、雞IgG、Biotin-BSA、BSA、SA-PE分別偶聯(lián)在不同編碼的熒光微球上;所述生物素化抗體為用羧基活性的生物素標(biāo)記兔抗雞IgG和山羊抗人IgG。
2.如權(quán)利要求1所述的檢測結(jié)核抗體的多重液相芯片,其特征在于,所述熒光微球在偶聯(lián)前采用EDC和S-NHS進(jìn)行活化。
3.如權(quán)利要求1所述的檢測結(jié)核抗體的多重液相芯片,其特征在于,生物素化抗體的制備方法為:
(1)取出待標(biāo)記的生物素,平衡至室溫;
(2)稱取生物素1mg,溶于200μL超純水,配制成5mg/mL的1液;
(3)根據(jù)生物素試劑盒推薦的所需蛋白量,每2mg蛋白需加5mg/mL的生物素溶液27μL,4℃放置2h;
(4)標(biāo)記生物素的抗原溶液過脫鹽柱,收集蛋白,用夾心ELISA驗證生物素標(biāo)記效果;
(5)將標(biāo)記好的生物素化抗原,分裝-70℃保存?zhèn)溆谩?/p>
4.如權(quán)利要求1-3任一項所述的檢測結(jié)核抗體的多重液相芯片,其特征在于,采用該多重液相芯片檢測時判斷的方法為:當(dāng)每種熒光編碼微球個數(shù)不少于35個,空白對照熒光強度不高于300時,表明試驗成立,可進(jìn)行結(jié)果判定;若MFI樣品孔/MFI空白對照≥3,則檢測結(jié)果判為陽性;若2≤MFI樣品孔/MFI空白對照<3,則檢測結(jié)果待定,需重復(fù)實驗;若MFI樣品孔/MFI空白對照<2,則檢測結(jié)果判定為陰性。
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