[發明專利]一種非診斷目的的雞白痢和雞傷寒沙門氏菌的定量檢測方法

在審

• 申請號: 201810022503.7
• 申請日: 2018-01-10
• 公開（公告）號: CN108362872A
• 公開（公告）日: 2018-08-03
• 發明（設計）人: 竇文超;趙廣英;朱海濤
• 申請（專利權）人: 浙江工商大學
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/569
• 代理公司: 杭州千克知識產權代理有限公司 33246
• 代理人: 黎雙華;李欣瑋

本發明公開了一種非診斷目的的雞白痢和雞傷寒沙門氏菌的快速檢測方法。本發明的檢測方法首先制備標記有雞白痢沙門氏菌和雞傷寒沙門氏菌抗體的偶聯納米磁珠(IgG?MNPs)和抗體及酶雙標記的二氧化硅納米微球(GOx?IgG?SiNPs)，當存在待測目的菌時，形成夾心“三明治”結構的免疫復合物IgG?MNPs/S.pullorum and S.gallinarum GOx?IgG?SiNPs，然后經過酶催化反應，反應產物與顯色劑形成絡合產物，最后通過檢測體系的吸光度值獲得雞白痢和雞傷寒沙門氏菌的濃度，從而實現了雞白痢沙門氏菌和雞傷寒沙門氏菌的定量檢測。本發明以葡萄糖氧化酶(GOx)觸發的級聯反應結合Fe³⁺?SCN^?顯色系統實現了雞白痢沙門氏菌和雞傷寒沙門氏菌的定量檢測，該檢測方法方便快捷，易操作，具有良好的靈敏度、特異性和穩定性。

技術領域

本發明屬于食品及食品原料安全檢測技術領域，特別是涉及食品和食品原料的一種非診斷目的的雞白痢和雞傷寒沙門氏菌的定量檢測方法。

背景技術

雞白痢沙門氏菌(Salmonella pullorum,S.pullorum)和雞傷寒沙門氏菌(Salmonella gallinarum,S.gallinarum)是雞白痢(Pullorum Disease,PD)和雞傷寒(Fowl typhoid,FT)的病原體，給家禽養殖業造成巨大損失，并嚴重威脅食品的安全性。由于雞白痢沙門氏菌和雞傷寒沙門氏菌具有相同的O1，O9， O12抗原，嚴格區分兩者很困難且在實際檢驗中也沒有必要，因而兩者通常一起檢測。對雞白痢沙門氏菌和雞傷寒沙門氏菌的檢測對于防控食品安全風險很有意義。

對致病菌的檢測方法包括標準方法和多種快速檢測方法，如數碼分類鑒定法、基于免疫標記技術和基于分子生物學的多類檢測方法。已有方法各有優點和不足，因此，運用多學科新知識、新材料和新技術交叉融合，構建更好的快速檢測技術是發展和應用的必然趨勢。

Chen等報道了一種用葡萄糖氧化酶催化葡萄糖溶液產生過氧化氫，以 PSS-GN-Pt納米復合材料作為過氧化物酶的模擬物，以此催化四甲基聯苯顯色，進而實現對葡萄糖的比色測定。這為我們設計構建新的比色系統提供了新思路，葡萄糖氧化酶催化葡萄糖產生H₂O₂，而H₂O₂可以在辣根過氧化物酶(HRP) 的協助下進行催化氧化和顯色反應。三價鐵離子(Fe³⁺)的經典反應就是其與硫氰酸根陰離子(SCN^-)的顯色反應，生成肉眼可見的紅色。因此，這一反應常常被應用于Fe³⁺的測定。此外，在酸性環境中，Fe²⁺可以被氧化為Fe³⁺。因此，可以利用葡萄糖氧化酶觸發的級聯反應結合Fe³⁺-SCN^-顯色系統建立新型免疫分析方法。

綜上，本發明針對現有雞白痢沙門氏菌和雞傷寒沙門氏菌檢測技術的缺陷，開發出一種基于葡萄糖氧化酶觸發的級聯反應系統結合Fe³⁺-SCN^-顯色系統的磁控免疫比色法，用IgG-MNPs對待測目標菌雞白痢沙門氏菌和雞傷寒沙門氏菌進行分離和富集，GOx-IgG-SiNPs作為信號指示物；構建IgG-MNPs-S. pullorum and S.gallinarum-GOx-IgG-SiNPs夾心結構，以GOx可以催化葡萄糖產生H₂O₂，H₂O₂氧化Fe²⁺變為Fe³⁺，Fe³⁺可快速與SCN^-發生絡合反應生成紅色產物，通過測量紅色產物的吸光度，以期實現定量測定食品中雞白痢沙門氏菌和雞傷寒沙門氏菌的濃度。

發明內容