[發明專利]一種氯噻啉生物發光側流免疫層析方法

在審

• 申請號: 201810016879.7
• 申請日: 2018-01-04
• 公開（公告）號: CN108562741A
• 公開（公告）日: 2018-09-21
• 發明（設計）人: 王鳴華;華修德;丁園
• 申請（專利權）人: 南京農業大學
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種氯噻啉生物發光側流免疫層析方法，其特征包括：

第一步：重組示蹤物與分析物共同競爭捕獲抗體的結合位點，

硝酸纖維素(NC)膜的處理：用PBS稀釋的分析物抗體(3.6mg/mL)和抗His-tag抗體(1.5mg/mL)分別作為檢測(test，T)線和控制(control，C)線，噴在NC膜上，兩條線的間距為5mm，將NC膜在37℃下干燥1小時，然后與樣品墊(玻璃纖維墊)和吸水墊組裝成整條，將組裝好的膜切成5mm寬，并裝入暗盒中，在室溫下儲存備用；加樣：將50μL的樣品與50μL的重組示蹤物：SEQ ID No.1所示序列(含有5μg蛋白質，0.2％吐溫20和2mg/mL BSA)混合，并將混合物加入到上樣孔并流過膜15分鐘；

第二步：檢測NC膜上的抗體捕獲的重組示蹤物，

洗膜：加入100μL PBS洗膜10分鐘；加入底物：從光學窗口向NC膜中加入發光底物產生發光信號；生物發光信號檢測：將暗盒插入到手機檢測配件中，并安裝在智能手機上，開啟相機，適當時間后手機拍照記錄圖像；

第三步：檢測結果的分析及結果判定，

方法1：將圖片導入imageJ 1.46r軟件中，測量T線和相鄰T線區域的平均光密度(背景信號)，而后扣除背景信號得到校正后的T線平均光密度值，以校正后的光密度值為縱坐標，氯噻啉標準溶液的對數為橫坐標建立標準曲線，獲得線性方程，將檢測結果帶入線性方程中計算出樣品中氯噻啉的含量；

方法2：用肉眼觀察手機拍攝的圖像，相對陰性對照的結果，若T線區域藍色熒光強度未減弱為陰性，若T線區域藍色熒光強度明顯減弱為弱陽性，若無藍色熒光條帶則為陽性。