[發明專利]一種用于植物生長素分離純化的層析柱及分離方法

有效

• 申請號: 201810015432.8
• 申請日: 2018-01-08
• 公開（公告）號: CN108211425B
• 公開（公告）日: 2021-07-06
• 發明（設計）人: 肖浪濤;蘇益;藺萬煌;王若仲;羅為桂
• 申請（專利權）人: 湖南農業大學
• 主分類號: B01D15/38
• 分類號: B01D15/38;C07D209/18;G01N30/02
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 胡輝

1.一種分離純化植物生長素的方法，其特征在于，使用層析柱，包括以下步驟：

1)將植物初提液注入層析柱，待生長素與植物生長素親和蛋白充分結合后從純化柱底部放出多余的液體，清洗柱床，酶切，收集柱床內溶液；

2)將收集的柱床內溶液濃縮干燥得到生長素與植物生長素親和蛋白的混合物，復溶混合物，離心后取上清即可得到生長素溶液；

其中，所述層析柱的制備包括以下步驟：

將植物生長素親和蛋白注入到樹脂中，使親和蛋白與樹脂充分結合，清洗后得到固定有親和蛋白的樹脂；

將固定有植物生長素親和蛋白的樹脂注入到空的蛋白質純化重力柱中，靜置后即獲得層析柱，其中，所述植物生長素親和蛋白選自TIR1受體蛋白、TIR1-IAA共受體蛋白；植物生長素親和蛋白上帶有蛋白標簽。

2.根據權利要求1所述的分離純化植物生長素的方法，其特征在于，TIR1-IAA共受體蛋白為TIR1-IAA7共受體蛋白。

3.根據權利要求1所述的分離純化植物生長素的方法，其特征在于，蛋白標簽為GST標簽。

4.根據權利要求1所述的分離純化植物生長素的方法，其特征在于，植物初提液的制備步驟為：液氮速凍后用研磨法充分粉碎植物樣品，加入緩沖液混勻，離心，上清即是植物初提液。

5.根據權利要求1所述的分離純化植物生長素的方法，其特征在于，復溶混合物使用的溶劑為乙腈水溶液。

6.根據權利要求5所述的分離純化植物生長素的方法，其特征在于，乙腈水溶液的質量分數為20％。

7.一種定量分析植物中生長素的方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)使用權利要求1～6任一項所述的方法分離純化植物生長素；

2)使用液相-質譜聯用儀檢測分析分離純化的植物生長素。