[發明專利]A群牛輪狀病毒檢測試劑盒和該病毒抗體膠體金試劑制備方法

在審

• 申請號: 201810013771.2
• 申請日: 2018-01-08
• 公開（公告）號: CN108152501A
• 公開（公告）日: 2018-06-12
• 發明（設計）人: 胡士林;崔曉辰;鄭建楠;李明群;曹雷;馬愛霞;崔尚金
• 申請（專利權）人: 山東畜牧獸醫職業學院;濰坊科瑞斯生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/531
• 代理公司: 北京卓特專利代理事務所(普通合伙) 11572
• 代理人: 段宇

1.一種A群牛輪狀病毒檢測試劑盒，包含試劑R1和試劑R2，其特征在于：

所述試劑R1為pH 6.0-8.0的緩沖液，其包括穩定劑、高分子加速劑、表面活性劑和防腐劑；

所述試劑R2為A群牛輪狀病毒抗體膠體金試劑，其包括穩定劑、抗A群牛輪狀病毒抗體納米金顆粒、防腐劑和緩沖液。

2.根據權利要求1所述的A群牛輪狀病毒檢測試劑盒，其特征在于：

所述試劑R1的緩沖液包括醋酸鹽緩沖液、氯化銨緩沖液、磷酸鹽緩沖液、三羥甲基氨基甲烷TRIS緩沖液、硼砂-氫氧化鈉緩沖液、甘氨酸緩沖液、3-(N-嗎啉)丙磺酸MOPS緩沖液、3-(環己胺)-2-羥基-1-丙磺酸CAPSO緩沖液、4-羥乙基哌嗪乙磺酸HEPES緩沖液中的一種或幾種。

3.根據權利要求1所述的A群牛輪狀病毒檢測試劑盒，其特征在于：

所述試劑R1的穩定劑包括亞氨基二乙酸、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸鈉、乙二胺四乙酸二鈉、二乙烯三胺五乙酸鈉、1,2-環己二醇縮水甘油、甘露糖、葡萄糖、殼聚糖、山梨醇和牛血清蛋白中的一種或幾種；

所述試劑R1的防腐劑包括疊氮鈉、苯酚、Proclin、對羥基苯甲酸、對羥基苯甲酸乙酯和乙基汞硫代硫酸鈉中的一種或幾種；

所述試劑R1的高分子加速劑包括脂肪醇聚氧乙烯醚、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸鈉、聚乙二醇、羥丙基甲基纖維素和羥甲基纖維素鈉中的一種或幾種；

所述試劑R1的表面活性劑包括Triton系列、Tween系列、月桂醚、聚氧乙烯烷基苯基醚、聚氧乙烯壬基苯基醚和聚氧乙烯辛基苯醚中的一種或幾種。

4.根據權利要求3所述的A群牛輪狀病毒檢測試劑盒，其特征在于：

所述試劑R1的穩定劑為質量體積比0.2-2% 的牛血清蛋白BSA；

所述試劑R1的高分子加速劑為質量體積比0.2-0.5% 的聚乙二醇PEG8000；

所述試劑R1的防腐劑為質量體積比0.1-0.5%的Proclin300；

所述試劑R1的表面活性劑為質量體積比0.05-0.1% Tween20；

所述試劑R1的緩沖液為pH6.0-8.0的磷酸鹽緩沖液。

5.根據權利要求1所述的A群牛輪狀病毒檢測試劑盒，其特征在于：

所述試劑R2的緩沖液包括磷酸鹽緩沖液、硼酸緩沖液、甘氨酸緩沖液、Tris-Cl緩沖液、HEPS緩沖液中的一種或多種；

所述試劑R2的穩定劑包括小牛血清、BSA、脫脂乳、明膠、甘露糖、葡萄糖、殼聚糖、山梨醇、甲醇、乙醇、乙二醇、丙三醇、Triton、Tween一種或幾種；

所述試劑R2的防腐劑包括疊氮鈉、苯酚、Proclin、對羥基苯甲酸、對羥基苯甲酸乙酯和乙基汞硫代硫酸鈉中的一種或幾種；

所述試劑R2的抗A群牛輪狀病毒抗體包括鼠抗A群BRoV單克隆抗體、羊抗A群BRoV多克隆抗體、兔抗A群BRoV多克隆抗體、雞抗A群BRoV單克隆抗體一種或多種混合。

6.根據權利要求5所述的A群牛輪狀病毒檢測試劑盒，其特征在于：

所述試劑R2的穩定劑為質量體積比10-20%蔗糖、質量體積比0.5-2% BSA和質量體積比3-10%甘油；

所述試劑R2的抗A群牛輪狀病毒抗體納米金顆粒為標記有鼠抗A群BRoV單克隆抗體的粒徑為60±1.5nm的金納米顆粒；

所述試劑R2的防腐劑為質量體積比0.1-0.5%的Proclin300；

所述試劑R2的緩沖液為pH6.0-8.0的磷酸鹽緩沖液；

金納米顆粒與抗體質量比為1:0.8-1:1.6。

7.一種A群牛輪狀病毒抗體膠體金試劑的制備方法，其特征是包括以下步驟：

步驟1）燒制膠體金；

步驟2）將抗體與膠體金納米顆粒偶聯，得到偶聯抗體的納米金顆粒溶液；

步驟3）離心，沉淀用含穩定劑、防腐劑的緩沖液重懸，調整濃度至為0.2。