[發明專利]一種編碼溶菌酶釋放蛋白的基因載體遺傳穩定性的檢測方法及應用

在審

• 申請號: 201810009858.2
• 申請日: 2018-01-04
• 公開（公告）號: CN108085291A
• 公開（公告）日: 2018-05-29
• 發明（設計）人: 余美倫;孟慶雪;秦香芹;李影;韓偉麗;何佳;王春東;苑玉鳳;王寧;唐世梅
• 申請（專利權）人: 哈爾濱瀚邦醫療科技有限公司
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/70;C12N15/31;C12R1/19
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371
• 代理人: 李雙艷

本發明提供了一種編碼溶菌酶釋放蛋白的基因載體遺傳穩定性的檢測方法及應用，屬于生物工程領域。本發明通過復蘇培養含有編碼溶菌酶釋放蛋白的基因載體質粒的宿主菌菌液，并進行連續多代的傳代培養，間隔一定的代數取樣并檢測，通過檢測人工保藏的含有編碼溶菌酶釋放蛋白的基因載體質粒的宿主菌的遺傳穩定性，為研究編碼溶菌酶釋放蛋白的基因載體提供可靠的支撐和保障；將上述檢測方法應用到編碼溶菌酶釋放蛋白的基因載體培養中，也可以為編碼溶菌酶釋放蛋白的基因載體的研究和培養提供參考和借鑒，具有重要的應用價值。

技術領域

本發明涉及生物工程領域，具體而言，涉及一種編碼溶菌酶釋放蛋白的基因載體遺傳穩定性的檢測方法及應用。

背景技術

豬鏈球菌是具有莢膜的一種革蘭氏陽性球菌。可根據其細胞壁抗原成分將其大致歸類為蘭氏分群(Lancefieldgroup D)D群鏈球菌。

豬鏈球菌病主要表現為豬的敗血性和局灶性淋巴結化膿性病癥。豬鏈球菌的自然感染部位是豬的上呼吸道(特別是扁桃體和鼻腔)、生殖道和消化道。豬在各種動物中易感性較高。各種年齡的豬均可發病，但敗血癥型和腦膜腦炎型多見于仔豬，化膿性淋巴結炎型多見于中豬。病豬、I臨床康復豬和健康豬均可帶菌，當健康豬群引入帶菌豬后，由于互相接觸，病菌可通過口、鼻、皮膚傷口而傳染。目前很少有針對編碼溶菌酶釋放蛋白的基因載體人工保藏的穩定性的研究。

發明內容

本發明的第一目的在于提供編碼溶菌酶釋放蛋白的基因載體遺傳穩定性的檢測方法，通過本檢測方法，可以對編碼溶菌酶釋放蛋白的基因載體的遺傳穩定性有較為可靠的認識，為編碼溶菌酶釋放蛋白的基因載體的研究提供可靠的支持。

本發明的第二目的在于提供上述編碼溶菌酶釋放蛋白的基因載體遺傳穩定性的檢測方法在編碼溶菌酶釋放蛋白的基因載體培養中的應用。

為了實現本發明的上述目的，采用以下技術方案：

一種編碼溶菌酶釋放蛋白的基因載體遺傳穩定性的檢測方法，包括：

于液體培養基中培養含有編碼溶菌酶釋放蛋白的基因載體質粒的宿主菌菌液；

連續傳代培養宿主菌菌液；

間隔取樣傳代培養的宿主菌菌液并進行遺傳穩定性檢測。

上述編碼溶菌酶釋放蛋白的基因載體遺傳穩定性的檢測方法在編碼溶菌酶釋放蛋白的基因載體培養中的應用。

本發明的有益效果為：本發明通過復蘇培養含有編碼溶菌酶釋放蛋白的基因載體質粒的宿主菌菌液，并進行連續多代的傳代培養，間隔一定的代數取樣并檢測，通過檢測人工保藏的含有編碼溶菌酶釋放蛋白的基因載體質粒在宿主菌中的遺傳穩定性，為研究編碼溶菌酶釋放蛋白的基因載體提供可靠的支撐和保障；將上述檢測方法應用到編碼溶菌酶釋放蛋白的基因載體培養中，也可以為編碼溶菌酶釋放蛋白的基因的研究提供參考和借鑒，具有重要的應用價值。

附圖說明

為了更清楚地說明本發明實施例的技術方案，下面將對實施例中所需要使用的附圖作簡單地介紹，應當理解，以下附圖僅示出了本發明的某些實施例，因此不應被看作是對范圍的限定，對于本領域普通技術人員來講，在不付出創造性勞動的前提下，還可以根據這些附圖獲得其他相關的附圖。

圖1為本發明實驗例4提供的第5代大腸桿菌的菌落形態圖；

圖2為本發明實驗例4提供的第15代大腸桿菌的菌落形態圖；

圖3為本發明實驗例4提供的第25代大腸桿菌的菌落形態圖；

圖4為本發明實驗例4提供的第40代大腸桿菌的菌落形態圖；

圖5為本發明實驗例4提供的第5代大腸桿菌PCR電泳結果圖；