[發明專利]一種編碼溶菌酶釋放蛋白的基因載體遺傳穩定性的檢測方法及應用在審
| 申請號： | 201810009858.2 | 申請日： | 2018-01-04 |
| 公開（公告）號： | CN108085291A | 公開（公告）日： | 2018-05-29 |
| 發明（設計）人： | 余美倫;孟慶雪;秦香芹;李影;韓偉麗;何佳;王春東;苑玉鳳;王寧;唐世梅 | 申請（專利權）人： | 哈爾濱瀚邦醫療科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N1/21 | 分類號： | C12N1/21;C12N15/70;C12N15/31;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371 | 代理人： | 李雙艷 |
| 地址： | 150000 黑龍江省*** | 國省代碼： | 黑龍江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 溶菌酶釋放蛋白 基因載體 遺傳穩定性 檢測 宿主菌 質粒 應用 培養含有編碼 生物工程領域 保藏 傳代培養 代數 多代 菌液 取樣 復蘇 參考 研究 支撐 | ||
1.一種編碼溶菌酶釋放蛋白的基因載體遺傳穩定性的檢測方法，其特征在于，包括：
于液體培養基中培養含有編碼溶菌酶釋放蛋白的基因載體質粒的宿主菌菌液；
連續傳代培養所述宿主菌菌液；
間隔取樣所述傳代培養的所述宿主菌菌液并進行遺傳穩定性檢測。
2.根據權利要求1所述的編碼溶菌酶釋放蛋白的基因載體遺傳穩定性的檢測方法，其特征在于，所述宿主菌菌液的接種量為所述液體培養基的體積的1％-6％。
3.根據權利要求1所述的編碼溶菌酶釋放蛋白的基因載體遺傳穩定性的檢測方法，其特征在于，所述宿主菌菌液為甘油菌液。
4.根據權利要求3所述的編碼溶菌酶釋放蛋白的基因載體遺傳穩定性的檢測方法，其特征在于，所述甘油菌液的制備包括：
將含編碼溶菌酶釋放蛋白的基因的載體質粒轉化到大腸桿菌感受態細胞中，通過鑒定引物檢測鑒定，得到陽性的重組大腸桿菌；
培養所述重組大腸桿菌，并添加甘油制成甘油菌種保藏。
5.根據權利要求4所述的編碼溶菌酶釋放蛋白的基因載體遺傳穩定性的檢測方法，其特征在于，所述大腸桿菌感受態細胞為TOP10細胞、DH5α細胞和BL21(DE3)細胞中的一種。
6.根據權利要求4所述的編碼溶菌酶釋放蛋白的基因載體遺傳穩定性的檢測方法，其特征在于，所述含編碼溶菌酶釋放蛋白的基因的載體質粒與所述大腸桿菌感受態細胞的體積比為1-4:100。
7.根據權利要求6所述的編碼溶菌酶釋放蛋白的基因載體遺傳穩定性的檢測方法，其特征在于，所述含編碼溶菌酶釋放蛋白的基因的載體質粒的濃度為1.7-4.8ng/μL。
8.根據權利要求4所述的編碼溶菌酶釋放蛋白的基因載體遺傳穩定性的檢測方法，其特征在于，所述轉化的方法為：混合所述含編碼溶菌酶釋放蛋白的基因的載體質粒和所述大腸桿菌感受態細胞，冰上放置25-37min；熱激35-55s，冰上放置2-3min。
9.根據權利要求4所述的編碼溶菌酶釋放蛋白的基因載體遺傳穩定性的檢測方法，其特征在于，所述檢測鑒定通過PCR反應實現，所述PCR反應的退火溫度為52-58℃。
10.如權利要求1-9任一項所述的編碼溶菌酶釋放蛋白的基因載體遺傳穩定性的檢測方法在編碼溶菌酶釋放蛋白的基因載體培養中的應用。
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