[發明專利]一種從水體中篩選產生高活性細菌揮發物的菌種的方法

有效

• 申請號: 201810008357.2
• 申請日: 2018-01-04
• 公開（公告）號: CN107988075B
• 公開（公告）日: 2021-01-08
• 發明（設計）人: 李義勇;許玫英;陳杏娟;席婧茹;李建軍
• 申請（專利權）人: 廣東省微生物研究所（廣東省微生物分析檢測中心）
• 主分類號: C12N1/02
• 分類號: C12N1/02
• 代理公司: 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001
• 代理人: 郝文婷;劉明星

本發明公開了一種從水體中篩選產生高活性細菌揮發物的菌種的方法。本發明方法是將環境水樣分別裝入第一樣品瓶和第二樣品瓶中；以LB平板涂布法分離獲得環境水樣中細菌的菌苔，以LB搖瓶發酵法制備受試菌的菌懸液；將菌苔接入第二樣品瓶中，將菌懸液接入第一樣品瓶中，再將第二樣品瓶置于第一樣品瓶中，密封第一樣品瓶瓶口，置于恒溫搖床發酵培養；測定第一樣品瓶中的菌懸液的吸光值，根據吸光值計算得到的抑制率或促進率的值，篩選得到產生高活性細菌揮發物的菌種。本發明方法可快速篩選得到水體環境中可產生高活性細菌揮發物的菌種，為水體微生物資源開發提供了新的方法和材料，且本發明方法可實現模塊化、流程化操作，具有良好的應用前景。

技術領域

本發明屬微生物資源開發技術領域，更具體地說，本發明涉及一種從水體中篩選產生高活性細菌揮發物的菌種的方法。

背景技術

揮發性物質是一類低分子量(＜300u)、在常溫常壓下易蒸發的化合物。盡管微生物學家很早就開始認識到細菌可以產生特有的氣味物質，但這些揮發性物質的多樣性和復雜性是以往微生物學家所忽視的。前人關于細菌產生的揮發性物質的研究主要集中在食物發酵和腐敗過程中由細菌產生的芳香氣味和臭味或者是建筑材料產生的霉味，而對于細菌產生揮發性物質的能力和效率研究較少。近年來，人們發現細菌產生的揮發性物質可以抑制或促進其他生物(包括真菌、植物和動物等)的生長和代謝，并且已發現了很多可以防治植物病蟲害、促進植物生長等可提高作物產量的揮發性物質，因此對細菌揮發物產生了越來越濃厚的興趣。

隨著氣質聯用和其他鑒定技術的飛速發展，可以定性或定量地鑒定出細菌產生的大部分主要的揮發性物質。Schulz(2007)和Korpi(2009)等對前人報道的細菌揮發性物質進行了總結分析，發現不同種類的細菌共產生了200種以上有機化合物，包括脂肪酸衍生物、芳香族化合物、含氮化合物、含硫化合物、萜類化合物和含硒(或其他非金屬元素)化合物等。還有很多細菌產生的揮發性物質未能得到結構鑒定，其生物活性也尚處于初級研究階段。這些數據充分說明了細菌揮發性物成分的復雜多樣，可作為某些特殊生物學功能化合物的一個重要來源。

迄今為止，還未見有針對水體環境中細菌活性揮發物質的研究體系報道，更未見有水體細菌揮發物快速篩選的專利申請。正如植物真菌病防治的迫切需求一樣，水產養殖動物細菌病的防治任務十分重大而緊迫。

發明內容

本發明的目的在于：提供一種從水體中篩選產生高活性細菌揮發物的菌種的方法，為水體微生物資源開發提供了新的方法和材料。

為了實現上述發明目的，本發明提供了一種從水體中篩選產生高活性細菌揮發物的菌種的方法，其包括如下步驟：

S1、將環境水樣分別裝入第一樣品瓶和第二樣品瓶中，所述環境水樣、第一樣品瓶和第二樣品瓶均為無菌，所述第二樣品瓶可容置于第一樣品瓶中；

S2、以LB平板涂布法分離獲得環境水樣中細菌的菌苔，以LB搖瓶發酵法制備受試菌的菌懸液；

S3、將所述菌苔接入第二樣品瓶中，將菌懸液接入第一樣品瓶中，將第二樣品瓶置于第一樣品瓶中，密封第一樣品瓶瓶口，置于恒溫搖床發酵培養；

S4、以不接種菌苔作為空白對照，用酶標儀法測定第一樣品瓶中的菌懸液的吸光值，根據吸光值計算得到的抑制率或促進率的值，篩選得到產生高活性細菌揮發物的菌種。

本發明的技術原理為：在瓶壁阻隔作用下，第二樣品瓶中的環境水樣的細菌(目標菌株)與第一樣品瓶中的受試菌株不發生直接接觸，僅允許上部氣相部分有雙向傳質作用即間接接觸。當前者產生的細菌揮發物在自身水相中達到一定濃度后，會逃逸入氣相并傳質進入后者的水相中，進而與后者的受試菌株發生作用，表現出促進生長、抑制生長或無明顯影響等現象。據此確定目標菌株產生活性細菌揮發物的潛力。

優選地，所述環境水樣中含有微生物生長所需的碳源、氮源、P、S及其它無機礦物類元素，包括但不限于水產養殖廢水、生活污水、天然水體或人工配水。