[發明專利]一種從水體中篩選產生高活性細菌揮發物的菌種的方法

有效

• 申請號: 201810008357.2
• 申請日: 2018-01-04
• 公開（公告）號: CN107988075B
• 公開（公告）日: 2021-01-08
• 發明（設計）人: 李義勇;許玫英;陳杏娟;席婧茹;李建軍
• 申請（專利權）人: 廣東省微生物研究所（廣東省微生物分析檢測中心）
• 主分類號: C12N1/02
• 分類號: C12N1/02
• 代理公司: 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001
• 代理人: 郝文婷;劉明星

1.一種從水體中篩選產生高活性細菌揮發物的菌種的方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1、將環境水樣分別裝入第一樣品瓶和第二樣品瓶中，所述環境水樣、第一樣品瓶和第二樣品瓶均為無菌，所述第二樣品瓶容置于第一樣品瓶中；

S2、以LB平板涂布法分離獲得環境水樣中細菌的菌苔，以LB搖瓶發酵法制備受試菌的菌懸液；

S3、將所述菌苔接入第二樣品瓶中，將菌懸液接入第一樣品瓶中，將第二樣品瓶置于第一樣品瓶中，密封第一樣品瓶瓶口，置于恒溫搖床發酵培養；

S4、以不接種菌苔作為空白對照，用酶標儀法測定第一樣品瓶中的菌懸液的吸光值，根據吸光值計算得到的抑制率或促進率的值，以抑制率/促進率大于20%或從大到小排序前3位的受試菌作為篩選得到的產生高活性細菌揮發物的菌種。

2.根據權利要求1所述的從水體中篩選產生高活性細菌揮發物的菌種的方法，其特征在于，所述環境水樣為水產養殖廢水、生活污水、天然水體或人工配水。

3.根據權利要求1所述的從水體中篩選產生高活性細菌揮發物的菌種的方法，其特征在于，所述第一樣品瓶的體積為6~200mL，所述第二樣品瓶的體積為3~20mL。

4.根據權利要求1所述的從水體中篩選產生高活性細菌揮發物的菌種的方法，其特征在于，所述以LB平板涂布法分離獲得環境水樣中細菌的菌苔的方法包括如下步驟：

將環境水樣10倍梯度稀釋，分別均勻涂布至LB平板上，然后倒置，于30~55℃下培養1~5天，得到菌苔。

5.根據權利要求1所述的從水體中篩選產生高活性細菌揮發物的菌種的方法，其特征在于，所述以LB搖瓶發酵法制備受試菌的菌懸液的方法包括如下步驟：

挑取受試菌，接入LB液體培養基中，于30~55℃下搖床培養8~24h，得到菌懸液。

6.根據權利要求1所述的從水體中篩選產生高活性細菌揮發物的菌種的方法，其特征在于，所述菌懸液接入第一樣品瓶的量為10~200μL。

7.根據權利要求1所述的從水體中篩選產生高活性細菌揮發物的菌種的方法，其特征在于，所述密封為螺紋密封。

8.根據權利要求1所述的從水體中篩選產生高活性細菌揮發物的菌種的方法，其特征在于，所述恒溫搖床發酵培養的條件是：30~55℃培養12~48h。

9.根據權利要求1所述的從水體中篩選產生高活性細菌揮發物的菌種的方法，其特征在于，所述抑制率的計算公式為：

抑制率(%)=(OD_{600 空白組}-OD_{600 試驗組})/OD_600空白組×100；

所述促進率的計算公式為：

促進率(%)=(OD_{600 試驗組}-OD_{600 空白組})/OD_600空白組×100。