[發明專利]一種豬鏈球菌細胞外因子基因的質粒遺傳穩定性的檢測方法及應用

在審

• 申請號: 201810007564.6
• 申請日: 2018-01-04
• 公開（公告）號: CN108103172A
• 公開（公告）日: 2018-06-01
• 發明（設計）人: 余美倫;李影;孟慶雪;秦香芹;韓偉麗;何佳;閆增福;王寧;苑玉鳳;李海英;王春東
• 申請（專利權）人: 哈爾濱瀚邦醫療科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/686
• 分類號: C12Q1/686
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371
• 代理人: 李雙艷

本發明提供了一種豬鏈球菌細胞外因子基因的質粒遺傳穩定性的檢測方法及應用，屬于生物工程領域。本發明通過復蘇培養豬鏈球菌細胞外因子基因的質粒的宿主菌菌液，并進行連續多代的傳代培養，間隔一定的代數取樣并檢測，通過檢測人工保藏的豬鏈球菌細胞外因子基因的質粒的宿主菌的遺傳穩定性，為研究豬溶血素基因提供可靠的支撐和保障；將上述檢測方法應用到豬鏈球菌細胞外因子基因的質粒研究中，也可以為豬溶血素基因的研究和培養提供參考和借鑒，具有重要的應用價值。

技術領域

本發明涉及生物工程領域，具體而言，涉及一種豬鏈球菌細胞外因子基因的質粒遺傳穩定性的檢測方法及應用。

背景技術

高致病性豬鏈球Ⅱ型菌(Streptococcus suisserotype 2，SS2)可引起一系列急性敗血癥、腦膜炎和關節炎等傳染性疾病，致殘、致死率較高，是一種重要的人畜共患性病原。

細胞外因子(Extracellular protein factor，EF)是SS2的主要標志性毒力因子和重要的保護性抗原之一。

豬鏈球菌病在各地均有發生，給養豬業造成了極大的影響和較大的經濟損失，目前沒有有效的抗體疫苗，因此對豬鏈球菌細胞外因子的研究需要加強，目前很少有針對含有豬鏈球菌細胞外因子基因的質粒的宿主菌人工保藏的穩定性的研究。

發明內容

本發明的第一目的在于提供豬鏈球菌細胞外因子基因的質粒遺傳穩定性的檢測方法，通過本檢測方法，可以對豬溶血素基因的遺傳穩定性有較為可靠的認識，為豬鏈球菌細胞外因子基因的研究提供可靠的支持。

本發明的第二目的在于提供上述豬鏈球菌細胞外因子基因的質粒遺傳穩定性的檢測方法在豬溶血素基因研究中的應用。

為了實現本發明的上述目的，采用以下技術方案：

一種豬鏈球菌細胞外因子基因的質粒遺傳穩定性的檢測方法，包括：

于液體培養基中培養含有豬鏈球菌細胞外因子基因的質粒的宿主菌菌液；

連續傳代培養宿主菌菌液；

間隔取樣傳代培養的宿主菌菌液并進行遺傳穩定性檢測。

上述豬鏈球菌細胞外因子基因的質粒遺傳穩定性的檢測方法在在豬鏈球菌細胞外因子基因研究中的應用。

本發明的有益效果為：本發明通過復蘇培養含有豬鏈球菌細胞外因子基因的質粒的宿主菌菌液，并進行連續多代的傳代培養，間隔一定的代數取樣并檢測，通過檢測人工保藏的豬鏈球菌細胞外因子基因的質粒的宿主菌的遺傳穩定性，為研究豬鏈球菌細胞外因子基因提供可靠的支撐和保障；將上述檢測方法應用到豬鏈球菌細胞外因子基因研究中，也可以為豬鏈球菌細胞外因子基因的研究和培養提供參考和借鑒，具有重要的應用價值。

附圖說明

為了更清楚地說明本發明實施例的技術方案，下面將對實施例中所需要使用的附圖作簡單地介紹，應當理解，以下附圖僅示出了本發明的某些實施例，因此不應被看作是對范圍的限定，對于本領域普通技術人員來講，在不付出創造性勞動的前提下，還可以根據這些附圖獲得其他相關的附圖。

圖1為本發明實驗例4提供的第5代大腸桿菌的菌落形態圖；

圖2為本發明實驗例4提供的第15代大腸桿菌的菌落形態圖；

圖3為本發明實驗例4提供的第25代大腸桿菌的菌落形態圖；

圖4為本發明實驗例4提供的第40代大腸桿菌的菌落形態圖；

圖5為本發明實驗例4提供的第5代大腸桿菌PCR電泳結果圖；

圖6為本發明實驗例4提供的第15代大腸桿菌PCR電泳結果圖；