[發明專利]一種豬鏈球菌細胞外因子基因的質粒遺傳穩定性的檢測方法及應用在審
| 申請號： | 201810007564.6 | 申請日： | 2018-01-04 |
| 公開（公告）號： | CN108103172A | 公開（公告）日： | 2018-06-01 |
| 發明（設計）人： | 余美倫;李影;孟慶雪;秦香芹;韓偉麗;何佳;閆增福;王寧;苑玉鳳;李海英;王春東 | 申請（專利權）人： | 哈爾濱瀚邦醫療科技有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/686 | 分類號： | C12Q1/686 |
| 代理公司： | 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371 | 代理人： | 李雙艷 |
| 地址： | 150000 黑龍江省*** | 國省代碼： | 黑龍江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 質粒 細胞外因子 遺傳穩定性 豬鏈球菌 檢測 鏈球菌細胞 溶血素基因 因子基因 宿主菌 種豬 基因 應用 生物工程領域 保藏 傳代培養 代數 多代 菌液 取樣 研究 復蘇 參考 支撐 | ||
1.一種豬鏈球菌細胞外因子基因的質粒遺傳穩定性的檢測方法，其特征在于，包括：
于液體培養基中培養含有豬鏈球菌細胞外因子基因的質粒的宿主菌菌液；
連續傳代培養所述宿主菌菌液；
間隔取樣所述傳代培養的所述宿主菌菌液并進行遺傳穩定性檢測。
2.根據權利要求1所述的豬鏈球菌細胞外因子基因的質粒遺傳穩定性的檢測方法，其特征在于，所述宿主菌菌液的接種量為所述液體培養基的體積的3％-7％。
3.根據權利要求1所述的豬鏈球菌細胞外因子基因的質粒遺傳穩定性的檢測方法，其特征在于，所述宿主菌菌液為甘油菌液。
4.根據權利要求3所述的豬鏈球菌細胞外因子基因的質粒遺傳穩定性的檢測方法，其特征在于，所述甘油菌液的制備包括：
將含豬鏈球菌細胞外因子基因的質粒轉化到大腸桿菌感受態細胞中，通過鑒定引物檢測鑒定，得到陽性的重組大腸桿菌；
培養所述重組大腸桿菌，并添加甘油制成甘油菌種保藏。
5.根據權利要求4所述的豬鏈球菌細胞外因子基因的質粒遺傳穩定性的檢測方法，其特征在于，所述大腸桿菌感受態細胞為TOP10細胞、DH5α細胞和BL21(DE3)細胞中的一種。
6.根據權利要求4所述的豬鏈球菌細胞外因子基因的質粒遺傳穩定性的檢測方法，其特征在于，所述豬鏈球菌細胞外因子基因的質粒與所述大腸桿菌感受態細胞的體積比為2-6:100。
7.根據權利要求6所述的豬鏈球菌細胞外因子基因的質粒遺傳穩定性的檢測方法，其特征在于，所述豬鏈球菌細胞外因子基因的濃度為2.5-7.1ng/μL。
8.根據權利要求4所述的豬鏈球菌細胞外因子基因的質粒遺傳穩定性的檢測方法，其特征在于，所述轉化的方法為：混合所述豬鏈球菌細胞外因子基因的質粒和所述大腸桿菌感受態細胞，冰上放置25-37min；熱激40-60s，冰上放置2-3min。
9.根據權利要求8所述的豬鏈球菌細胞外因子基因的質粒遺傳穩定性的檢測方法，其特征在于，所述熱激的溫度為42℃。
10.如權利要求1-9任一項所述的豬鏈球菌細胞外因子基因的質粒遺傳穩定性的檢測方法在豬溶血素基因研究中的應用。
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