[發明專利]構建測序文庫

在審

• 申請號: 201780090660.5
• 申請日: 2017-03-20
• 公開（公告）號: CN110914449A
• 公開（公告）日: 2020-03-24
• 發明（設計）人: 楊亮;馮駿;張海川
• 申請（專利權）人: 賽雷納（中國）醫療科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6869
• 分類號: C12Q1/6869;C40B50/06
• 代理公司: 成都欣圣知識產權代理有限公司 51292
• 代理人: 王海文;王淇

1.一種用于構建測序文庫的方法，其特征在于，包括以下步驟：

a)提供包含核酸的樣本，其中，所述樣本中的一些所述核酸具有靶核酸序列；

b)富集步驟a)所述的靶核酸序列；

c)針對靶核酸序列進行第一次多重PCR以獲得擴增子；

d)對步驟c)所得樣品進行富集以獲得目標擴增子；

e)對所述目標擴增子、測序接頭和barcode進行第二次多重PCR以獲得帶有barcode的目標擴增子。

2.一種用于構建測序文庫的方法，其特征在于，包括以下步驟：

a)提供包含核酸的樣本，其中，所述樣本中的一些所述核酸具有靶核酸序列；

b)富集步驟a)所述的靶核酸序列；

c)針對靶核酸序列進行第一次多重PCR以獲得擴增子；

d)對步驟c)所得樣品進行富集以獲得目標擴增子；

e)對所述目標擴增子、測序接頭和barcode進行第二次多重PCR以獲得帶有barcode的目標擴增子；

f)富集步驟e)所述的帶有barcode的目標擴增子。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述靶核酸序列包括1～300個核苷酸。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述富集操作所采用的方法包括使用磁珠，其中，所述磁珠在樣品中結合靶核酸序列后，自剩余樣品中分離。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一次多重PCR或第二次多重PCR采用一組以上的引物對以及一個熱啟動聚合酶。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述引物對具有通用序列和靶序列。

7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述擴增子具有通用序列和靶序列。

8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述富集操作所采用的方法包括使用過濾器處理擴增子，其中，所述過濾器截留擴增子而允許未消化引物和引物二聚體通過。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，所述過濾器為PCR產物過濾器。

10.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述富集操作所采用的方法還包括采用過濾器處理含有擴增子、引物二聚體和/或未消化引物的樣品，并采用磁珠結合過濾的擴增子后自剩余物中分離。

11.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述第二次多重PCR采用正向引物和下游引物。

12.根據權利要求11所述的方法，其特征在于，所述下游引物具有測序接頭和通用序列。

13.根據權利要求11所述的方法，其特征在于，所述下游引物具有測序接頭、barcode和通用序列。

14.根據權利要求11所述的方法，其特征在于，所述正向引物包括測序接頭和通用序列。

15.根據權利要求11所述的方法，其特征在于，所述正向引物具有測序接頭、barcode和通用序列。

16.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述富集操作所采用的方法包括使用磁珠在含有帶有barcode的目標擴增子、引物二聚體和/或未消化引物的樣品中結合所述帶有barcode的目標擴增子后自剩余物中分離。

17.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述富集操作所采用的方法包括使用磁珠在核酸和靶核酸中結合所述核酸而使所述核酸與所述靶核酸分離。