[發明專利]用于評價測試物質的免疫原性的方法

在審

• 申請號: 201780084567.3
• 申請日: 2017-12-26
• 公開（公告）號: CN110214192A
• 公開（公告）日: 2019-09-06
• 發明（設計）人: 久保千代美;本山茂記;荒田義之
• 申請（專利權）人: 中外制藥株式會社
• 主分類號: C12Q1/06
• 分類號: C12Q1/06;G01N33/15;G01N33/50
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責任公司 11021
• 代理人: 高麗娜;張瑩

本發明發現，通過使用在已被測試物質刺激的T細胞群體(優選為CD4⁺T細胞群體)中的在IL?2分泌初期期間的時間點(優選為通過測試物質刺激之后24小時～72小時)的IL?2分泌細胞的比例作為測試物質的免疫原性的指標，可以在短時間內評價測試物質的免疫原性。

技術領域

本發明涉及用于評價免疫原性的方法，其特征在于在IL-2分泌細胞中檢測IL-2的時間和方式。進一步地，本發明涉及用于篩選藥物候選物質的方法，其特征在于評價測試物質的免疫原性。

背景技術

今日，許多具有復雜結構的藥物如蛋白質在市場上是可獲得的。在人體中異物進入體內引起免疫應答，在藥物的領域中也是，在免疫應答中，源自蛋白質的活性成分被識別為外來蛋白質，這種藥物作為抗原的作用可能導致抗藥物抗體(ADA)的產生。ADA的產生可能具有不利的影響例如藥物的治療效果降低，在一些情況下，可誘發可以危及生命的免疫應答。

因此，在含有源自蛋白質的活性成分的藥物的開發中，需要從開發的較早階段評價大量測試物質的免疫原性。因此，已經對通過篩選用于選擇較低免疫原性的測試物質作為候選物質的方法進行了研究。已知的手段為如下的測定方法，其中用測試物質刺激源自人組織的細胞，并使用通過免疫應答誘導的T細胞的增殖或在細胞增殖活躍時產生細胞因子如IL-2的細胞的數量作為指標來評價所述物質(例如：參見專利文獻1及非專利文獻1)。

關于T細胞的活化，已經報道了IL-2產生及IL-2受體α(CD25)表達的作用(例如，參見專非專利文獻2)。在該報告中，將用肽刺激的樹突細胞與T細胞進行共培養，其中所述肽源自已知具有非常強免疫原性的麥芽糖結合蛋白質(MBP)，所述共培養導致IL-2產生的誘導及T細胞增殖；然而，在細胞不進行共培養或在共培養前將抗IL-2受體α(CD25)抗體添加至樹突細胞的情況下，即使用肽進行刺激，也幾乎檢測不到IL-2產生或細胞增殖。也有報道稱，用如蛋白質制劑(例如，抗體制劑)那樣的免疫原性更低的物質刺激，響應的T細胞非常少(非專利文獻3、4)。實際上，已經報道了在活性T細胞增殖前的階段，有很少的供體響應蛋白質制劑的刺激，就對于該刺激進行應答的特異性T細胞的增殖程度、表現為伴隨細胞增殖而產生細胞因子的供體的頻率而言，因用于進行刺激的蛋白質制劑而不同(非專利文獻1)。因此，由相對于測試物質的免疫應答誘導的T細胞的增殖、當細胞增殖活躍時細胞因子的產生已作為用于評價測試物質的免疫原性的指標受到關注。

本說明書中引用的參考文獻如下列出。這些文獻中記載的內容通過參考全部并入本說明書。需要說明的是，這并不意味著將這些文獻中的任一個作為相對于本說明書的現有技術。

現有技術文獻

專利文獻

專利文獻1：日本特表2009-528044號公報

非專利文獻

非專利文獻1：PLoS One.2016 Aug 5；11(8):e0159328.

非專利文獻2：Nat Med.2011 May；17(5):604-609.

非專利文獻3：FASEB J.2011 Jun；25(6):2040-2048.

非專利文獻4：Clin Immunol.2013 Dec；149(3):534-555.

發明概述

[本發明要解決的問題]

在常規的方法中，其中T細胞的免疫應答用于評價測試物質的免疫原性或對測試物質篩選藥物候選物質，所述評價或篩選是在T細胞活躍增殖時(在測試物質的存在下，培養開始之后5～7天或以后)進行的。因此，需花費一定時間或更久的時間，以使得T細胞的增殖可在蛋白質水平檢測。因此，從效率方面來看，所述常規方法作為用于選擇適于藥物的候選物質的工藝是不夠的。本發明的目的是，在測試物質的存在下，在培養開始之后短時間內實現免疫原性的評價。