[發(fā)明專利]角膜上皮細胞群的制造方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201780083387.3 | 申請日： | 2017-12-27 |
| 公開（公告）號： | CN110168076A | 公開（公告）日： | 2019-08-23 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 西田幸二;林龍平;柴田峻 | 申請（專利權(quán)）人： | 國立大學(xué)法人大阪大學(xué) |
| 主分類號： | C12N5/071 | 分類號： | C12N5/071;A61K35/30;A61L27/38;A61P27/02 |
| 代理公司： | 北京路浩知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002 | 代理人： | 張晶;謝順星 |
| 地址： | 日本*** | 國省代碼： | 日本;JP |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 角膜上皮細胞 層粘連蛋白 細胞群 制備 磁性細胞 陽性細胞 粘附細胞 陰性 制造 細胞 移植 制作 自由 | ||
1.一種制造用于制作移植用角膜上皮細胞片的角膜上皮細胞群的方法，其特征在于，其包括以下的工序(1)～(3)：
(1)制備包含角膜上皮細胞的細胞群的工序；
(2)將工序(1)中制備的細胞群供于磁性細胞分離，獲得CD200陰性且SSEA-4陽性的細胞的工序；及
(3)使工序(2)中獲得的細胞與選自由具有α3鏈的層粘連蛋白、具有α4鏈的層粘連蛋白及具有α5鏈的層粘連蛋白組成的組中的層粘連蛋白或其E8片段接觸，獲得粘附細胞的工序。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制造方法，其中，所述工序(3)為：(3-1)使工序(2)中獲得的細胞與具有α2鏈的層粘連蛋白或其E8片段接觸而獲得非粘附細胞的工序；及(3-2)使得到的非粘附細胞與選自由具有α3鏈的層粘連蛋白、具有α4鏈的層粘連蛋白及具有α5鏈的層粘連蛋白組成的組中的層粘連蛋白或其E8片段接觸，獲得粘附細胞的工序。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的制造方法，其中，所述包含角膜上皮細胞的細胞群為將多能干細胞分化誘導(dǎo)為眼周圍細胞而得到的細胞群。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的制造方法，其中，所述用于制作移植用角膜上皮細胞片的角膜上皮細胞群中的PAX6陽性且p63陽性的細胞的比例為50％以上。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的制造方法，其中，選自由具有α3鏈的層粘連蛋白、具有α4鏈的層粘連蛋白及具有α5鏈的層粘連蛋白組成的組中的層粘連蛋白或其E8片段為層粘連蛋白α3β3γ2的E8片段、層粘連蛋白α4β1γ1的E8片段或?qū)诱尺B蛋白α5β1γ1的E8片段。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制造方法，其中，具有α2鏈的層粘連蛋白或其E8片段為層粘連蛋白α2β1γ1的E8片段。
7.一種移植用角膜上皮細胞片的制造方法，其特征在于，其包括以下的工序(1)～(4)：
(1)制備包含角膜上皮細胞的細胞群的工序；
(2)將工序(1)中制備的細胞群供于磁性細胞分離，獲得CD200陰性且SSEA-4陽性的細胞的工序；
(3)使工序(2)中獲得的細胞與選自由具有α3鏈的層粘連蛋白、具有α4鏈的層粘連蛋白及具有α5鏈的層粘連蛋白組成的組中的層粘連蛋白或其E8片段接觸，獲得粘附細胞的工序；及
(4)對工序(3)中獲得的細胞進行培養(yǎng)的工序。
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