[發(fā)明專(zhuān)利]反義寡核苷酸

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201780081337.1
• 申請(qǐng)日: 2017-10-16
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110177877A
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-08-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 烏坦·蘇拉那;魏建汶;林靜;林冰
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 新加坡科技研究局
• 主分類(lèi)號(hào): C12N15/113
• 分類(lèi)號(hào): C12N15/113;A61K31/7088;A61P35/00
• 代理公司: 廣州粵高專(zhuān)利商標(biāo)代理有限公司 44102
• 代理人: 隆翔鷹

本發(fā)明涉及用于調(diào)節(jié)甘氨酸脫羧酶活性(GLDC)的反義寡核苷酸。具體地，本發(fā)明涉及能夠誘導(dǎo)RNA外顯子跳躍的反義寡核苷酸。還要求保護(hù)使用所述反義寡核苷酸治療癌癥和誘導(dǎo)外顯子跳躍的藥物組合物、試劑盒和方法。此外，提供一種基于評(píng)估源自患者的樣品中GLDC核酸、蛋白質(zhì)或活性的水平，用于幫助分類(lèi)或確定癌癥的預(yù)后或者為癌癥患者選擇治療策略的方法。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及反義寡核苷酸。具體地，本發(fā)明涉及能夠誘導(dǎo)RNA外顯子跳躍的反義寡核苷酸。

背景技術(shù)

更具體地，本申請(qǐng)涉及癌癥領(lǐng)域，具體涉及以下領(lǐng)域：過(guò)量表達(dá)甘氨酸脫羧酶(GLDC)的癌癥，諸如非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)，以及其他癌癥，諸如淋巴瘤(例如，濾泡性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤)、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、乳腺癌、前列腺癌、肺癌和結(jié)腸癌等。本文中示出了直接和選擇性靶向GLDC蛋白豐度(例如，通過(guò)反義寡核苷酸(ASO)介導(dǎo)的外顯子跳躍)導(dǎo)致細(xì)胞周期停滯和/或癌細(xì)胞凋亡。還提供了證據(jù)表明正常組織中GLDC的部分消耗(例如，通過(guò)反義寡核苷酸(ASO)介導(dǎo)的外顯子跳躍)沒(méi)有副作用。

GLDC是屬于氧化還原酶家族的酶，特別是那些以二硫化物作為受體作用于供體的CH-NH₂基團(tuán)的酶。該酶參與甘氨酸、絲氨酸和蘇氨酸代謝。它采用磷酸吡哆醛作為輔助因子。GLDC是來(lái)自所有真核生物中催化甘氨酸的降解的甘氨酸裂解系統(tǒng)的四種蛋白質(zhì)中的一種。對(duì)于甘氨酸腦病，人體中高水平的甘氨酸或甘氨酸積聚是已知的。

在本說(shuō)明書(shū)中列出或討論明顯在先公開(kāi)的文件不應(yīng)被視為承認(rèn)該文件是現(xiàn)有技術(shù)的一部分或是公知常識(shí)。

本文中所提及的任何文件均通過(guò)引用整體并入本文。

發(fā)明內(nèi)容

在本發(fā)明的第一方面中，提供了一種用于調(diào)節(jié)GLDC活性的分離的反義寡核苷酸。

優(yōu)選地，術(shù)語(yǔ)“調(diào)節(jié)”是指激活、抑制、延遲、阻遏或干擾以下各項(xiàng)中的一項(xiàng)或多項(xiàng)；GLDC的活性；對(duì)GLDC的RNA剪接或翻譯后加工；GLDC的磷酸化；GLDC的表達(dá)水平，其包括mRNA和/或前mRNA表達(dá)和蛋白質(zhì)表達(dá)在內(nèi)的GLDC表達(dá)的水平；或GLDC的亞細(xì)胞定位。優(yōu)選地，在本發(fā)明中，寡核苷酸調(diào)節(jié)以下各項(xiàng)中的一項(xiàng)或多項(xiàng)的活性或水平：前mRNA、成熟mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)。在各種實(shí)施例中，寡核苷酸抑制GLDC的表達(dá)或修飾其表達(dá)產(chǎn)物。在特定實(shí)施例中，寡核苷酸通過(guò)誘導(dǎo)GLDC前mRNA或成熟mRNA的外顯子的跳躍來(lái)抑制GLDC的表達(dá)以誘導(dǎo)細(xì)胞周期停滯和/或凋亡。更具體地，寡核苷酸抑制GLDC在表達(dá)GLDC的細(xì)胞中的表達(dá)。

優(yōu)選地，寡核苷酸與GLDC前mRNA或成熟mRNA的靶區(qū)域特異性雜交。如本文中所使用的，“雜交”意指根據(jù)Watson-Crick DNA互補(bǔ)性、Hoogstein結(jié)合(Hoogstein binding)或本領(lǐng)域已知的其他序列特異性結(jié)合的規(guī)則在兩條或三條核酸鏈之間通過(guò)氫鍵產(chǎn)生的相互作用。雜交可以在本領(lǐng)域已知的不同嚴(yán)格條件下執(zhí)行。

更優(yōu)選地，本發(fā)明的反義寡核苷酸對(duì)一種或多種RNA結(jié)合剪接調(diào)節(jié)劑發(fā)揮空間位阻效應(yīng)。例如，在實(shí)施例中，寡核苷酸通過(guò)空間位阻阻止mRNA的翻譯。

優(yōu)選地，寡核苷酸與GLDC RNA的外顯子、內(nèi)含子或外顯子-內(nèi)含子邊界靶區(qū)域特異性雜交，該靶區(qū)域是選自包括以下各項(xiàng)的組中的任一項(xiàng)：外顯子2、外顯子3、外顯子6、外顯子7、外顯子8、外顯子9、外顯子10、外顯子12、外顯子13、外顯子15、外顯子16、外顯子19、外顯子20、外顯子21、內(nèi)含子6、內(nèi)含子7、以及內(nèi)含子8。在下表中示出這些序列。

表：靶外顯子和內(nèi)含子的基因組序列