[發明專利]三維體外肺泡肺模型、所述模型的制備方法以及其用于確定和/或預測可吸入物的致敏效果的用途

在審

• 申請號: 201780081184.0
• 申請日: 2017-12-26
• 公開（公告）號: CN110168075A
• 公開（公告）日: 2019-08-23
• 發明（設計）人: 阿林·沙里;阿爾諾·古特萊貝;托馬索·塞爾基;布倫海爾德·布洛梅克
• 申請（專利權）人: 盧森堡理工學院
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;C12N5/0784;G01N33/50
• 代理公司: 北京天昊聯合知識產權代理有限公司 11112
• 代理人: 孫微;金小芳

1.一種三維體外肺泡肺模型，主要包括以下四種細胞類型：

a)能夠分泌表面活性物質的肺泡II型上皮細胞，

b)構成提供滲透性屏障的毛細血管內襯層的內皮細胞，

c)樹突狀細胞，

d)巨噬細胞樣細胞，能夠通過吞噬作用攝入外來物質，從而參與防御機制，其中：

所述三維體外肺泡肺模型是培養孔的形式，所述培養孔配備有多孔膜，該多孔膜將孔分成暴露于氣-液界面的頂部隔室，以及浸沒在培養基中的基底側隔室，所述上皮細胞和所述巨噬細胞存在于頂部隔室中，且所述內皮細胞和所述樹突狀細胞存在于基底側隔室并浸入在培養基中，

所述多孔膜具有2μm至10μm的孔，以使樹突狀細胞能夠從基底側隔室遷移至頂部隔室。

2.根據權利要求1所述的模型，其中所述巨噬細胞樣細胞是用PMA(佛波醇-12-肉豆蔻酸酯-13-乙酸酯)或1,25-二羥基維生素D3分化的THP-1細胞，優選用PMA分化。

3.根據權利要求1和2中任一項所述的模型，其中所有細胞均為永生化人類細胞系。

4.根據前述權利要求中任一項所述的模型，其中所述肺泡II型上皮細胞是A549細胞。

5.根據前述權利要求中任一項所述的模型，其中所述內皮細胞是EA.hy926細胞。

6.根據前述權利要求中任一項所述的模型，其中所述樹突狀細胞是未分化的THP-1細胞。

7.根據權利要求1至6中任一項所述的模型，其中所述多孔膜具有3μm至8μm的孔。

8.根據前述權利要求中任一項所限定的三維體外肺泡肺模型的制備方法，包括在具有多孔膜的插入物中共培養細胞a)-d)，步驟順序如下：

i)在具有2μm至10μm的孔的膜插入物的下表面(其將成為基底側)接種0.24 10⁵至0.610⁵內皮細胞/cm²，

ii)至少4小時后，在膜插入物的另一側(頂部側)接種肺泡II型上皮細胞，優選0.12 10⁵至1.2 10⁵，優選0.5 10⁵至1.0 10⁵細胞/cm²，

iii)約4天后，在膜插入物的基底側加入含有10-100萬個樹突狀細胞/mL的細胞懸液，然后

iv)在肺泡II型上皮細胞孢子上添加巨噬細胞樣細胞，優選0.12 10⁵至1.2 10⁵巨噬細胞樣細胞/cm²，最后，

v)將膜插入物引入培養基中，使所述內皮細胞和所述樹突狀細胞(存在于基底側隔室)浸入共培養基中，并且所述上皮細胞和所述巨噬細胞樣細胞存在于頂部隔室的氣-液界面處。

9.根據權利要求8所述的方法，其中所述巨噬細胞樣細胞為用PMA(佛波醇-12-肉豆蔻酸酯-13-乙酸酯)分化的THP-1細胞，和/或所述肺泡II型上皮細胞為A549細胞，和/或所述內皮細胞為EA.hy926細胞，和/或所述樹突狀細胞為未分化的THP-1細胞。

10.根據權利要求1至7中任一項所限定的三維體外肺泡肺模型用于評估可吸入物對肺的肺泡屏障的刺激潛力或毒性的用途。

11.根據權利要求1至7中任一項所述的三維體外肺泡肺模型用于確定和/或預測可吸入物對肺的肺泡屏障的致敏作用的用途。