[發明專利]細胞培養基材

在審

• 申請號: 201780079488.3
• 申請日: 2017-12-12
• 公開（公告）號: CN110114454A
• 公開（公告）日: 2019-08-09
• 發明（設計）人: 高田哲生;櫻井直人;一色綾子;山東典子
• 申請（專利權）人: DIC株式會社
• 主分類號: C12M3/00
• 分類號: C12M3/00;C12N5/07
• 代理公司: 北京林達劉知識產權代理事務所(普通合伙) 11277
• 代理人: 劉新宇;李茂家

本發明提供一種細胞培養基材，其特征在于，所述細胞培養基材含有具有最低臨界溶解溫度的聚合物，該基材含有選自水溶脹性粘土礦物和二氧化硅中的1種以上無機材料，進而基材中具有粘附基質，該粘附基質為細胞外基質和/或粘附性合成基質。另外，上述細胞外基質為選自層粘連蛋白、纖連蛋白、玻連蛋白、鈣粘著蛋白和它們的片段中的至少一種，和/或，粘附性合成基質為聚[2?(甲基丙烯酰氧基)乙基二甲基?(3?磺丙基)氫氧化銨]或負載有寡肽的聚合物。

技術領域

本發明涉及用于細胞培養的基材。

背景技術

人iPS細胞、ES細胞之類的人多能性干細胞由于在病理闡明、新藥開發以及再生醫療中的應用可能性而受到關注。在人多能性干細胞的利用中，需要穩定且安全地培養、進而將培養的細胞回收后用于藥物研發、醫療。

一直以來，人多能性干細胞的低培養率日益成為問題。作為解決方法之一，嘗試了利用飼養細胞的培養方法，但存在所使用的飼養細胞污染這樣的問題，因此不能稱之為安全。

作為該問題的解決對策，專利文獻1報道了下述方案：在細胞培養基材上涂布作為細胞外基質的層粘連蛋白和層粘連蛋白片段，從而即使無飼養細胞也能培養人多能性干細胞。

另一方面，專利文獻1雖然能夠在基材上培養，但是并未言及培養細胞的回收，在培養細胞的利用方面存在問題。例如，用上述方法培養的細胞與細胞外基質的粘附強，因此通過在酶處理后用細胞刮棒(橡膠或樹脂制刮刀)等物理方式歸攏細胞的方法來回收細胞，操作效率低且會造成物理性刺激，因此存在對細胞的存活率造成不良影響的問題。

另一方面，在將層粘連蛋白等細胞外基質用于人多能性干細胞時，存在細胞外基質容易失活的問題。特別是，如果基材表面干燥則細胞外基質失活、人多能性干細胞的培養效率下降。若考慮到細胞培養基材的保存運輸等，則在干燥狀態下也維持培養效率這一點很重要。專利文獻2公開了一種細胞培養基材，其通過涂布層粘連蛋白以外的蛋白質而能耐受干燥狀態，雖然該方案也能夠培養，但未解決培養細胞的回收這一問題。

現有技術文獻

專利文獻

專利文獻1:WO2011/043405

專利文獻2:WO2014/199754

發明內容

發明要解決的問題

本發明的課題在于，提供一種即使對于人多能性干細胞也能高效率地培養、并且能夠將培養后的細胞以維持高存活率的狀態剝離而回收的細胞培養基材。另外，還提供一種能夠進行細胞剝離、并且還能耐受干燥狀態的細胞培養基材。

用于解決問題的方案

本發明人們進行了深入研究，結果發現下述細胞培養基材能夠解決上述課題，所述細胞培養基材的特征在于，所述細胞培養基材含有具有最低臨界溶解溫度的聚合物，該基材含有選自水溶脹性粘土礦物和二氧化硅中的1種以上無機材料，進而基材中具有粘附基質，該粘附基質為細胞外基質和/或粘附性合成基質。

另外，提供一種細胞培養基材，其中，細胞外基質為選自層粘連蛋白、纖連蛋白、玻連蛋白、鈣粘著蛋白和它們的片段中的至少一種。

另外，提供一種細胞培養基材，其中，粘附性合成基質為聚[2-(甲基丙烯酰氧基)乙基二甲基-(3-磺丙基)氫氧化銨]或負載有寡肽的聚合物。

提供一種細胞培養基材，其中，上述具有最低臨界溶解溫度的聚合物為下述式(1)所示的單體(a)與親水性的酰胺系乙烯基單體(b)的共聚物(B1)、上述單體(a)與下述式(2)所示的單體(c)的共聚物(B2)、或者單體(a)與下述式(3)所示的含有聚乙二醇鏈的單體(d)的共聚物(B3)中的至少一種，