[發明專利]用磁性顆粒分離高純度核酸的方法

有效

• 申請號: 201780077771.2
• 申請日: 2017-12-14
• 公開（公告）號: CN110088282B
• 公開（公告）日: 2023-10-24
• 發明（設計）人: J·斯特洛埃德;C·霍克斯坦
• 申請（專利權）人: 恰根有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 陶家蓉;錢文宇

1.一種從樣品溶液分離核酸的方法，其中從樣品溶液分離核酸是通過吸附到磁性顆粒，然后通過施加磁場從樣品溶液中分離具有吸附于其上的核酸的磁性顆粒，接著進行至少一個洗滌步驟(w)，包括：

(w1)將具有吸附其上的核酸的磁性顆粒懸浮于洗滌液中，其是水性溶液，其具有小于100mM的總鹽濃度且不含有機溶劑，

(w2)在洗滌溶液中孵育具有吸附于其上的核酸的磁性顆粒，和

(w3)從洗滌溶液分離具有吸附于其上的核酸的磁性顆粒。

2.如權利要求1所述的方法，其中核酸是DNA、RNA或兩者，DNA和RNA，優選DNA。

3.如前述權利要求中至少一項所述的方法，其中洗滌溶液具有低于25mM的總鹽濃度。

4.如前述權利要求中至少一項所述的方法，其中洗滌溶液由水和可任選的鹽組成。

5.如前述權利要求中至少一項所述的方法，其中洗滌步驟(w)進行5分鐘或更短。

6.如前述權利要求中至少一項所述的方法，其中核酸，優選DNA，分別具有至少10kb或kbp的鏈長度。

7.如權利要求1-5中至少一項所述的方法，其中核酸，優選DNA，分別具有小于10kb或kbp的鏈長度，其中洗滌步驟(w)進行2分鐘或更短。

8.如前述權利要求中至少一項所述的方法，其中洗滌步驟(w)具有以下一個或多個特征：

-其上結合有核酸的磁性顆粒不經受機械力，

-其上結合有核酸的磁性顆粒不經受振蕩和/或水平施加的機械力，

-其上結合有核酸的磁性顆粒經受垂直施加的機械力，優選重力，

-其上結合有核酸的磁性顆粒經受磁力，優選垂直施加的磁力，

-其上結合有核酸的磁性顆粒懸浮在洗滌溶液中，而不施加機械力，

-其上結合有核酸的磁性顆粒懸浮在洗滌溶液中，而不施加振蕩和/或水平施加的機械力，

-其上結合有核酸的磁性顆粒懸浮在洗滌溶液中，且施加垂直施加的機械力，優選重力，

-其上結合有核酸的磁性顆粒懸浮在洗滌溶液中，且施加磁力，優選垂直施加的磁力。

9.如前述權利要求中至少一項所述的方法，洗滌步驟(w)前在至少一個預洗滌步驟(p)中用洗滌溶液洗滌其上吸附有核酸的磁性顆粒，洗滌溶液是含有高于500mM的總鹽濃度和/或包含有機溶劑的水性溶液。

10.如前述權利要求中至少一項所述的方法，其中洗滌步驟(w)后用洗脫溶液從磁性顆粒洗脫核酸。

11.如前述權利要求中至少一項所述的方法，其中磁性顆粒包含二氧化硅。

12.如前述權利要求中至少一項所述的方法，其中樣品溶液包含離液鹽和/或醇。

13.如前述權利要求中至少一項所述的方法，包括步驟：

(a)在含有核酸的樣品溶液中加入磁性顆粒，

(b)孵育步驟(a)的樣品溶液使核酸吸附到磁性顆粒，

(c)在來自步驟(b)的樣品溶液上施加磁場以固定其上吸附有核酸的磁性顆粒，

(d)除去樣品溶液，

(e)在權利要求1的洗滌步驟(w)中用洗滌溶液洗滌磁性顆粒，和

(f)可任選的，用洗脫溶液從所述磁性顆粒洗脫核酸。

14.如前述權利要求中至少一項所述的方法，其中該方法是自動化方法。

15.一種水性溶液的用途，其具有小于100mM的總鹽濃度且不含有機溶劑，用作在從樣品溶液分離核酸的方法中洗滌其上吸附有核酸的磁性顆粒的洗滌溶液，其中其上吸附有核酸的磁性顆粒懸浮于洗滌溶液。