[發(fā)明專利]用于定量免疫組織化學(xué)的方法和系統(tǒng)

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201780076071.1
• 申請日: 2017-12-18
• 公開（公告）號: CN110337588B
• 公開（公告）日: 2023-02-17
• 發(fā)明（設(shè)計）人: W·德;Z(大衛(wèi))·江;A·佩達塔
• 申請（專利權(quán)）人: 文塔納醫(yī)療系統(tǒng)公司
• 主分類號: G01N33/542
• 分類號: G01N33/542;G01N33/543;G01N33/58;C12Q1/28
• 代理公司: 北京坤瑞律師事務(wù)所 11494
• 代理人: 岑曉東

提供了用于靶蛋白分子(包括分泌的靶蛋白分子)的定量免疫組織化學(xué)(IHC)的方法和系統(tǒng)。該方法包含對樣品引入:對該靶蛋白分子特異性的一級抗體；與二級抗體酶綴合的二級抗體,該二級抗體是對該一級抗體特異性的；與酪胺半抗原綴合的酪胺,其中該二級抗體酶催化該酪胺半抗原沉積至該樣品上；與三級抗體酶綴合的三級抗體,該三級抗體是對該酪胺半抗原特異性的；和生色團,其中該三級抗體酶催化與該生色團的反應(yīng)以使得該生色團可見。該生色團是使用顯微術(shù)作為點狀點可見的。

發(fā)明領(lǐng)域

本發(fā)明涉及免疫組織化學(xué)技術(shù),更加具體地,用于定量免疫組織化學(xué)的方法和系統(tǒng)。

發(fā)明背景

預(yù)后性和/或預(yù)測性蛋白質(zhì)生物標志物的自動化檢測中使用的當(dāng)前技術(shù)依賴于閾數(shù)目的生物標志物分子(例如大于1個,1,000個,10,000個,等)來產(chǎn)生可見信號。因而,產(chǎn)生可見信號需要的蛋白質(zhì)生物標志物分子的數(shù)目取決于所使用的檢測技術(shù)的特征,主要是靈敏度和特異性。如此,當(dāng)前技術(shù)不能檢測或量化獨個蛋白質(zhì)分子。結(jié)果是,幾乎所有已建立的預(yù)后性和/或預(yù)測性蛋白質(zhì)生物標志物的臨床評估限于使用二元分析:加與減,反映信號的存在或缺失。

本發(fā)明特征在于放大信號的方法。本發(fā)明有助于降低產(chǎn)生可見信號需要的分子的閾數(shù)目。令人驚訝地,如預(yù)期的,本發(fā)明的方法具有足夠的特異性以產(chǎn)生點狀點,與彌漫的信號或團跡形成對比。可以對點狀點計數(shù)。在某些實施方案中,本發(fā)明的方法可應(yīng)用于分泌的蛋白質(zhì)。

在某些實施方案中,本發(fā)明可用于定量免疫組織化學(xué)的方法,其中點狀點可代表獨個靶分子且可計數(shù)。在某些實施方案中,本發(fā)明能夠檢測和分析分泌的蛋白質(zhì)因子(或其它適宜的分泌因子,不限于蛋白質(zhì)),而當(dāng)前的技術(shù)并不對自細胞分泌的蛋白質(zhì)產(chǎn)生可解讀的信號。這些量化是經(jīng)由產(chǎn)生點狀點信號的放大系統(tǒng)和生色團的增加而實現(xiàn)的。

不希望將本發(fā)明限于任何理論或機制,認為靶分子的信號和表達水平的量化可幫助為患者提供與產(chǎn)生二元(加或減)結(jié)果的傳統(tǒng)方法相比另外的預(yù)后價值和/或預(yù)測價值。

本發(fā)明還容許多種靶分子的多路化信號,例如使用具有窄吸收光譜的可分解染料。

發(fā)明概述

本發(fā)明特征在于用于定量免疫組織化學(xué)的方法和系統(tǒng)。例如,本發(fā)明利用能夠產(chǎn)生點狀點信號的一種高靈敏度放大系統(tǒng)(例如酪胺-DIG,酪胺-NP)和特定生色團。

在某些實施方案中,本發(fā)明提供一種用于檢測結(jié)合至獨個靶蛋白生物標志物的獨個分子(例如抗體)的技術(shù)。點狀點信號的產(chǎn)生幫助實現(xiàn)靶蛋白生物標志物(例如蛋白質(zhì)或其它靶分子,包括分泌的靶蛋白生物標志物)的檢測,分析,和量化。

本發(fā)明提供用于放大樣品中的靶分子的信號的方法(例如用于放大福爾馬林固定,石蠟包埋(FFPE)組織樣品中的靶分子的信號的方法)。方法可包含用去石蠟化試劑處理組織樣品并用抗原修復(fù)試劑處理組織樣品。方法可進一步包含用蛋白酶處理樣品,例如在應(yīng)用對靶蛋白生物標志物特異性的生物標志物特異性藥劑之前。

在一些實施方案中,方法包含對樣品應(yīng)用:對靶蛋白生物標志物特異性的生物標志物特異性藥劑；對生物標志物特異性藥劑特異性的第二結(jié)合劑,其中第二結(jié)合劑是與二級酶綴合的；包含與酪胺半抗原綴合的酪胺分子的酪胺劑,其中二級酶催化酪胺半抗原沉積至樣品上(例如在第二結(jié)合劑的位置處)；對酪胺半抗原特異性的第三結(jié)合劑,其中第三結(jié)合劑是與三級酶綴合的；和可檢測模塊(例如生色團),其中三級酶催化與可檢測模塊(例如生色團)的反應(yīng)以使得可檢測模塊(例如生色團)可見。可檢測模塊(例如生色團)可以是使用顯微術(shù)(例如明視野顯微術(shù))作為點狀點可見的。點狀點可指示獨個靶分子。