[發明專利]用于組織結構的可視化的裝置和方法

在審

• 申請號: 201780074212.6
• 申請日: 2017-11-30
• 公開（公告）號: CN110023755A
• 公開（公告）日: 2019-07-16
• 發明（設計）人: 諾伯特·格雷茨;羅杰·魯道夫;斯蒂芬妮·魏因富爾特;欽齊亞·布倫納;黃佳國;阿里夫烏爾毛拉·可汗
• 申請（專利權）人: 諾伯特·格雷茨;羅杰·魯道夫;斯蒂芬妮·魏因富爾特;欽齊亞·布倫納;黃佳國;阿里夫烏爾毛拉·可汗
• 主分類號: G01N33/50
• 分類號: G01N33/50;C08G73/02;G01N33/52
• 代理公司: 北京柏杉松知識產權代理事務所(普通合伙) 11413
• 代理人: 王春偉;劉繼富

本發明涉及包含(i)多陽離子聚合物和(ii)染料的化合物，該多陽離子聚合物與染料結合。本發明還涉及一種用于使生物樣品中含葡糖胺的結構可視化的方法，該方法包括a)使所述生物樣品的內腔與染料綴合的多陽離子聚合物接觸，優選與根據本發明的化合物接觸；b)組織清除所述生物樣品；以及，從而，c)使所述生物樣品中內部的含葡糖胺的結構可視化。本發明還涉及利用使含葡糖胺的結構可視化的方法來確定在腎或其樣品中腎小球的數量和/或大小的方法；并且還涉及與所述化合物和所述方法相關的試劑盒和用途。

本發明涉及包含(i)多陽離子聚合物和(ii)染料的化合物，該多陽離子聚合物與染料結合。本發明還涉及一種用于使生物樣品中含葡糖胺的結構可視化的方法，該方法包括a)使所述生物樣品的內腔與染料綴合的多陽離子聚合物接觸，優選與根據本發明的化合物接觸；b)組織清除所述生物樣品；并且，從而，c)使所述生物樣品中內部含葡糖胺的結構可視化。本發明還涉及利用使含葡糖胺的結構可視化的方法來確定腎或其樣品中腎小球的數量和/或大小的方法；還涉及與所述化合物和所述方法相關的試劑盒和用途。

近年來已經看到對組織和器官的結構分析的大量改進。在特定的清除技術中，即從組織中去除脂質同時留下完整的整體結構的技術，為三維分析提供了光學上透明的準備。與合適的顯微方法結合的清除技術已經被應用于整個器官和甚至整個生物體(Lee等人(2014),BMV Dev Biol 14:781doi 10.1186/s12861-014-0048-3；Pan等人(2016)NatMethods 13(10):859-67),providing resolution down to the single cell level(Susaki和Ueda(2016),Cell Chem Biol 23:137)。已經提出了用于這些方法中的多種標記，包括熒光標記的抗體、親脂性染料等(Marx(2016),Nature Methods 13(3):205)。例如，使用熒光標記的抗體在腎炎腎中確定腎小球的數量和毛細血管束的大小(Klingberg等人(2016),JASN 28,提前出版2016年8月3日；doi 10.1681/ASN.2016020232)。然而，由于目標結構在清除過程中可能會變性或者例如在脂質結構如細胞膜的情況下可能被完全去除，因此清除過程對標記方法提出了特定的問題。

亞乙基亞胺的聚合物，特別是各種形式的聚亞乙基亞胺(PEI)，具有各種技術用途。在生命科學中，PEI及其衍生物尤其用于沉淀核酸和用于使用DNA轉染細胞(參見例如Thomas和Klibanov(2003),PNAS 100(16):9138、US2005/0170450A1、US2011/0020927A1、US7863470B2、US8445025 B2、和US8003734B2)。

目前對腎小球進行計數的主要方法是使用昂貴的設備，例如磁共振成像(MRI)。該設備與陽離子鐵蛋白一起使用，該陽離子鐵蛋白與該基膜結合，并且當處于磁場時，該設備由于含有鐵成分而干擾磁場。然而，在蛋白尿的常見情況下，陽離子鐵蛋白穿過基膜，而不再能鑒定腎小球，因為信號也在小管內出現。這種假信號不能通過分割來克服，從而使得陽離子鐵蛋白的使用對于腎小球計數來說是非常有問題的(Bennet等人(2013),AmericanJournal of Physiology-Renal Physiology 304(10):F1252)。

因此，本領域中仍然需要用于使組織結構可視化的改進裝置和方法，特別是用于使襯在器官內腔中的結構可視化的改進裝置和方法，和/或用于使腎中的腎小球可視化的改進裝置和方法，從而避免現有技術的缺點。該問題通過本文公開的裝置和方法來解決。

因此，本發明涉及包含(i)多陽離子聚合物和(ii)染料的化合物，該多陽離子聚合物與染料結合。