[發明專利]通過快速LAMP分析進行染色體評估

在審

• 申請號: 201780073612.5
• 申請日: 2017-10-19
• 公開（公告）號: CN110023508A
• 公開（公告）日: 2019-07-16
• 發明（設計）人: 塞繆爾·威廉姆斯;克里斯蒂娜·布拉茲尼克
• 申請（專利權）人: 塞繆爾·威廉姆斯;克里斯蒂娜·布拉茲尼克
• 主分類號: C12Q1/6851
• 分類號: C12Q1/6851
• 代理公司: 北京派特恩知識產權代理有限公司 11270
• 代理人: 浦彩華;姚開麗

1.一種分析一種或多種核酸模板的方法，該方法包括：a)提供多重反應混合物，其包含：(i)至少一種待擴增的核酸模板，(ii)至少一種核酸靶標，(iii)用于擴增該核酸模板的引物，和(iv)用于擴增該核酸靶標的引物；b)用聚合酶共擴增該復雜模板核酸和該核酸靶標，其中該共擴增等溫地發生并且包括至少94℃的熱脈沖步驟，其中核酸模板和核酸靶標被擴增；c)使該核酸模板歸一化，其中在完成步驟b)的共擴增后進行該歸一化。

2.如權利要求1所述的方法，其中總擴增的對照核酸的量和總核酸模板的量與該核酸模板的完整擴增相關。

3.如權利要求1所述的方法，其中該共擴增步驟等溫地進行。

4.如權利要求3所述的方法，其中該等溫共擴增步驟包括基于核酸序列的擴增(NASBA)、環介導的擴增(LAMP)、解旋酶依賴性擴增(HDA)、滾環擴增(RCA)、重組酶聚合酶擴增(RPA)或多重置換擴增(MDA)。

5.如權利要求1所述的方法，其中分析一種或多種核酸模板包括對非整倍性、拷貝數變異(CNV)和遺傳性別進行測試。

6.如權利要求1所述的方法，其中分析一種或多種核酸模板包括病原體檢測。

7.如權利要求1所述的方法，其中該一種或多種核酸模板是人類染色體。

8.如權利要求1所述的方法，其中該核酸靶標是與如權利要求7所述的人類染色體不同的人類染色體。

9.如權利要求7所述的方法，其中該人類染色體是21號染色體。

10.如權利要求8所述的方法，其中該人類染色體是1號染色體。

11.如權利要求1所述的方法，其中該聚合酶濃度為約0.28至約0.56單位/μL。

12.如權利要求1所述的方法，其中對于qLAMP分析，Tm為約60℃至約65℃。

13.如權利要求1所述的方法，其中對于NEST，Tm為約57℃至約72℃。

14.如權利要求1所述的方法，其中該引物濃度為約25nM至約1600nM。

15.如權利要求1所述的方法，其中鎂濃度為約5mM至約8mM。

16.如權利要求1所述的方法，其中該模板DNA濃度小于0.1ng。

17.如權利要求1所述的方法，其中檢測到靶DNA濃度的1.5倍差異。

18.如權利要求1所述的方法，該方法進一步包含用于擴增多種核酸靶標和多種核酸模板的多種引物。

19.如權利要求14所述的方法，其中F3/B3引物對的濃度為約25nM至約200nM。

20.如權利要求14所述的方法，其中LF/LB引物對的濃度為約50nM至約400nM。

21.如權利要求14所述的方法，其中BIP引物對的濃度為約200nM至約1600nM。

22.如權利要求14所述的方法，其中FIP引物對的濃度為約200nM至約1600nM。

23.如權利要求22所述的方法，其中在基于SyBr Green的反應中，該FIP引物對濃度為約200nM至約1600nM。