[發明專利]致耐受性DNA疫苗

在審

• 申請號: 201780068074.0
• 申請日: 2017-11-01
• 公開（公告）號: CN109922827A
• 公開（公告）日: 2019-06-21
• 發明（設計）人: J.查普林;M.維雅蘭納庫拉
• 申請（專利權）人: 諾和諾德股份有限公司
• 主分類號: A61K39/00
• 分類號: A61K39/00;A61P3/10
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 初明明;黃登高

本發明涉及用于耐受免疫，特別是用于預防和/或延遲例如1型糖尿病的編碼胰島素抗原和細胞因子的質粒。

技術領域

本發明涉及用于降低抗原特異性T細胞反應性的致耐受性DNA免疫治療疫苗。

背景技術

根據傳統的疫苗方法，將純化的蛋白質/抗原注射到人/患者/動物體內，以刺激特異性針對該蛋白質/抗原的免疫應答。這種疫苗方法往往主要影響抗體產生，而T細胞往往不會受到顯著影響，除了生成抗原的T細胞記憶外。因此，傳統的疫苗方法被認為不適合于治療和/或預防T細胞驅動的疾病，例如1型糖尿病(T1D)，因為T細胞，特別是CD8⁺ T細胞的激活被認為是該疾病的致病原因。使用致耐受性的、基于蛋白質的疫苗的實驗方法主要針對產生抗體的B細胞，而不是疾病相關的T細胞。

與基于蛋白質的疫苗相比，基于DNA的疫苗通常是編碼特定抗原的質粒—這些質粒被宿主體內的細胞攝取(“轉染”)。然后這些轉染的宿主細胞產生抗原，并將該抗原加工成小片段(T細胞表位)以呈遞給免疫系統，特別是呈遞給循環T細胞。由于T細胞只能檢測這些小抗原片段而不能檢測完整的蛋白質，因此該方法優先導致T細胞應答的改變，特別是針對CD8⁺ T細胞(或細胞毒性T細胞)—例如T1D病理學的關鍵驅動因素。因此，DNA疫苗適合于誘導T細胞應答，而蛋白質疫苗則不適合。雖然目前沒有可用于人類的DNA疫苗，但有三種刺激性質粒DNA疫苗被許可用于獸醫用途：誘導對馬傳染性貧血病毒、西尼羅病毒和某些犬癌癥的免疫。

與刺激性DNA疫苗相反，致耐受性DNA免疫治療疫苗旨在抑制針對抗原的免疫反應性，而不是激活針對該抗原的免疫應答。這些疫苗不刺激針對所編碼的抗原的免疫，或者不改變刺激的類型(像例如針對變態反應的抗原脫敏接種方法一樣)，而是導致自身反應性T細胞的消耗和/或功能缺乏和/或死亡。為了做到這一點，必須將抗原呈遞給免疫系統而沒有共刺激或炎癥效應，否則其將引發刺激性免疫應答。這種呈遞會被免疫系統忽視或耐受的抗原的方法在治療自身免疫性疾病中可能是有價值的，因為將會針對該疾病的特定機制，而不是全身性地抑制整個免疫應答。因此，致耐受性DNA免疫治療疫苗是調節不希望的免疫應答的溫和方法。

T1D特異性致耐受性DNA免疫治療疫苗的最終目標是保持β細胞功能和內源性胰島素產生。這可以通過以下手段來發生：預防或延遲疾病(在難以監測并且生活“常態”是主要患者驅動因素的兒童和年輕成人群組中特別有價值)，或延長最小監測和胰島素使用的“蜜月期”—經常在T1D診斷后的前六個月出現。

雖然已知基于DNA的疫苗是安全的，但是已經在臨床研究中測試的(刺激性或致耐受性)DNA疫苗均不具有足夠的效力作為治療例如T1D的獨立方法。本領域已知的致耐受性DNA疫苗顯示出很低的效能，并且通常需要高度人工系統來誘導所需的效果。因此，本領域需要具有顯著增加的效力而不損害安全性概況且最好也不需要不方便的施用方案的致耐受性DNA免疫治療疫苗。

發明內容

本發明涉及多順反子載體/質粒，其共表達/編碼細胞保留的抗原，如胰島素，以及分泌的免疫調節物，如TGF-β、IL-10和可選的IL-2。本發明還涉及包含這類質粒的DNA免疫治療疫苗以及這類藥物制劑及其試劑盒。本發明最后涉及這類產品的醫藥用途以及制備這類質粒的方法。

本文的質粒/DNA免疫治療疫苗在治療主要由T細胞驅動的自身免疫性疾病，例如1型糖尿病(T1D)中具有治療潛力。

在一方面，本發明提供了質粒，其編碼：

i.胰島素抗原；

ii.TGF-β；以及

iii.IL-10。

附圖簡述

圖1.環狀質粒圖譜。

圖2.圖1質粒的載體產物的mRNA和翻譯的蛋白質圖譜。