[發明專利]用于在方向選擇性視網膜神經節細胞中特異性表達基因的啟動子SynP198

有效

• 申請號: 201780067090.8
• 申請日: 2017-11-01
• 公開（公告）號: CN110072557B
• 公開（公告）日: 2022-11-11
• 發明（設計）人: D·哈特爾;J·于特納;A·克雷布斯;B·羅斯卡;D·舒伯勒
• 申請（專利權）人: 弗里德里克·米謝爾生物醫學研究所
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;C12N15/85
• 代理公司: 北京市中咨律師事務所 11247
• 代理人: 張莉;黃革生

本發明提供了一種分離的核酸分子，所述分離的核酸分子包含SEQ ID NO:1的核酸序列或與SEQ ID NO:1的所述序列具有至少80％同一性的至少400bp的核酸序列，或者由前述序列組成，其中所述分離的核酸分子在與編碼基因的核酸序列可操作地連接時特異性地導致所述基因在方向選擇性視網膜神經節細胞中的表達。

技術領域

本發明涉及導致基因在方向選擇性視網膜神經節細胞中特異性表達的核酸序列。

背景技術

出于表達目的，通常將重組基因在活性表達盒的背景下作為cDNA構建體轉染到靶細胞、細胞群或組織中，以允許異源基因轉錄。DNA構建體在涉及順式調控元件上的許多反式作用轉錄因子(TF)的活性的過程中被細胞轉錄機器識別，這些順式調控元件包括增強子、沉默子、絕緣子和啟動子(本文統稱為“啟動子”)。

基因啟動子參與所有這些層面的調控，通過整合DNA序列、轉錄因子結合特征和表觀遺傳特征的影響，充當基因轉錄中的決定因素。它們決定例如由質粒載體編碼的轉基因表達的強度，以及將在其中表達所述轉基因的一種或多種細胞類型。

用于驅動哺乳動物細胞中的異源基因表達的最常見啟動子是人和小鼠巨細胞病毒(CMV)主要立即早期啟動子。它們賦予強烈的表達，并且已在若干細胞類型中證明了穩健性。其他病毒啟動子如SV40立即早期啟動子和勞氏肉瘤病毒(RSV)長末端重復序列(LTR)啟動子也經常用在表達盒中。

也可以使用細胞啟動子代替病毒啟動子。已知的啟動子有來自管家基因的那些啟動子，這些管家基因編碼大量轉錄的細胞轉錄物，如β-肌動蛋白、延伸因子1-α(EF-lα)或泛素。與病毒啟動子相比，真核基因表達更復雜并且需要許多不同因子的精確協調。

關于內源性調控元件用于轉基因表達的用途的一個方面是產生穩定的mRNA，并且該表達可以在宿主細胞的天然環境中進行，其中相應地提供反式作用轉錄因子。由于真核基因的表達受順式和反式作用調控元件的復雜機制控制，因此大多數細胞啟動子未得到廣泛的功能表征。部分真核啟動子通常緊鄰其轉錄序列的上游，并且充當轉錄起始點。核心啟動子直接圍繞轉錄起始位點(TSS)，該位點足以被轉錄機器識別。近端啟動子包含核心啟動子上游的區域，并且含有TSS和轉錄調控所需的其他序列特征。轉錄因子通過與啟動子和增強子序列中的調控基序結合而序列特異性地起作用，從而激活染色質和組蛋白修飾酶，這些酶改變核小體結構及其位置，最終允許轉錄起始。功能性啟動子的鑒定主要取決于相關上游或下游增強子元件的存在。

關于內源性調控元件用于轉基因表達的用途的另一關鍵方面是一些啟動子可以按細胞特異性方式起作用并且將導致轉基因在特定類型的細胞上/中表達，或根據啟動子，在特定亞群的細胞中表達。

因此，本發明的一個目的是獲得適于在哺乳動物細胞中以高表達水平且以細胞類型特異性方式表達重組基因的新序列。

此類序列解決本領域對視網膜細胞特異性啟動子的需要，以開發用于研究神經退行性疾病、視力恢復、藥物發現、腫瘤治療和疾病診斷的系統。

發明內容

本發明的諸位發明人已結合表觀遺傳學、生物信息學和神經科學來尋找當處于眼睛中時，僅驅動在方向敏感性視網膜神經節細胞中的基因表達的啟動子。

本發明的序列的核酸序列為：