[發(fā)明專利]具有降低的免疫原性的HLA I類缺陷的NK-92細胞在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201780060685.0 | 申請日： | 2017-09-29 |
| 公開（公告）號： | CN109804064A | 公開（公告）日： | 2019-05-24 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | F·納瓦羅;H·克林格曼 | 申請（專利權(quán)）人： | 南克維斯特公司 |
| 主分類號： | C12N5/0783 | 分類號： | C12N5/0783;C12N15/10;C12N15/113;C12N9/22;C07K14/74;A61K35/17 |
| 代理公司： | 北京市金杜律師事務(wù)所 11256 | 代理人： | 陳文平;徐志明 |
| 地址： | 美國加利*** | 國省代碼： | 美國;US |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 細胞 修飾 表達水平 免疫原性 微球蛋白 細胞治療 癌癥 遺傳 | ||
本文描述了包含減少NK?92細胞中的β?2?微球蛋白(B2M)表達的遺傳改變以降低HLA I類表達水平的修飾的NK?92細胞；產(chǎn)生這些細胞的方法；及使用B2M?修飾的NK?92細胞治療受試者(例如，患有癌癥的受試者)的方法。
本申請要求2016年9月29日提交的第62/401653號美國臨時申請的優(yōu)先權(quán)利益，該申請以引用方式并入本文中。
背景技術(shù)
基于細胞的免疫療法是治療癌癥的有力工具。使用表達嵌合抗原受體的工程化原代T細胞(CAR-T細胞)的淋巴惡性腫瘤患者治療的早期成功將這一領(lǐng)域推向癌癥免疫治療的前沿。除了CAR-T細胞外，基于NK細胞的使用的免疫療法也正在開發(fā)。
NK-92是在患有非霍奇金斯淋巴瘤的受試者血液中發(fā)現(xiàn)和然后離體永生化的細胞溶解性癌細胞系。NK-92細胞來源于NK細胞，但缺乏正常NK細胞所呈現(xiàn)的主要抑制性受體，而同時保留大多數(shù)激活受體。然而，NK-92細胞不攻擊正常細胞，也不在人類中引起不可接受的免疫排斥反應(yīng)。NK-92細胞系的表征公開于WO 1998/49268及美國專利申請公開第2002-0068044號中。NK-92細胞也作為治療某些癌癥的潛在治療劑被評估。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供具有降低的HLA I類表達的修飾的NK-92細胞、產(chǎn)生這類細胞的方法和使用該修飾的NK-92細胞治療疾病(例如，癌癥) 的方法。
在一個方面，本公開因此提供β-2微球蛋白(B2M)-修飾的NK-92 細胞，其包含抑制β-2微球蛋白的表達的B2M-靶向的改變。在一些實施方式中，B2M-修飾的NK-92細胞的β-2微球蛋白基因經(jīng)遺傳改變以抑制B2M的表達。在一些實施方式中，B2M-修飾的NK-92細胞包含靶向B2M且抑制其表達的一種或多種干擾RNA。在一些實施方式中，由B2M-修飾的NK-92細胞表達的β-2-微球蛋白的量與不具有靶向β-2-微球蛋白的改變的NK-92細胞相比降低至少20％，至少30％，至少50％，至少60％或至少80％。在一些實施方式中，權(quán)利要求1 的B2M-修飾的NK-92細胞通過敲低或敲除NK-92細胞中的β-2微球蛋白(例如，使用CRISPR)產(chǎn)生。在一些實施方式中，細胞通過敲除NK-92細胞中的β-2微球蛋白(例如，使用CRISPR)產(chǎn)生。在一些實施方式中，NK-92細胞被另外地修飾以表達包含HLA-E結(jié)合肽、 B2M和HLA-E重鏈的單鏈三聚體。在一些實施方式中，單鏈三聚體包含B2M(β2微球蛋白)信號肽、Cw*03前導(dǎo)肽(例如，Cw*0304前導(dǎo)肽)、成熟B2M多肽和成熟HLA-E多肽。在一些實施方式中，Cw*03 前導(dǎo)肽通過柔性接頭連接于成熟B2M多肽和/或成熟B2M多肽通過柔性接頭連接于成熟HLA-E多肽。一個或兩個柔性接頭可以包含Gly 和Ser。在一些實施方式中，HLA-E重鏈包含成熟HLA-EG氨基酸序列。在一些實施方式中，單鏈三聚體包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列。
在一些實施方式中，B2M-修飾的NK-92細胞(例如，如本文中和之前的段落中所述的)表達至少一種Fc受體或至少一種嵌合抗原受體(CAR)。在一些實施方式中，B2M-修飾的NK-92細胞(例如，如本文中和之前的段落中所述的)表達在細胞表面上的至少一種Fc 受體和至少一種CAR。在一些實施方式中，F(xiàn)c受體是CD16。在一些實施方式中，CD16多肽是具有成熟形式的158位處的纈氨酸的人 CD16多肽，其對應(yīng)于包括原始信號肽的人CD16序列的176位。在一些實施方式中，至少一種Fc受體包含編碼與SEQ ID NO:5的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的多肽的多核苷酸序列且包含對應(yīng)于SEQ ID NO:5的158位的位置處的纈氨酸。在一些實施方式中， Fc受體是FcγRIII。在一些實施方式中，CAR包含F(xiàn)cεRIγ的胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域。在一些實施方式中，CAR靶向腫瘤相關(guān)抗原。在一些實施方式中， B2M-修飾的NK-92細胞經(jīng)修飾以進一步表達細胞因子。在一些實施方式中，細胞因子是白介素-2或其變體。在一些實施方式中，細胞因子靶向于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。
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