[發明專利]用于調節因子IX功能的組合物和方法

在審

• 申請號: 201780059441.0
• 申請日: 2017-07-27
• 公開（公告）號: CN109789181A
• 公開（公告）日: 2019-05-21
• 發明（設計）人: 瓦爾德·R·阿魯達;羅德尼·M·卡米爾;本杰明·薩梅爾森-瓊斯
• 申請（專利權）人: 費城兒童醫院
• 主分類號: A61K38/00
• 分類號: A61K38/00;A61K38/36;A61K38/48;A61P7/00;C07K14/435;C07K14/745
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 劉明海;寧濤

公開了因子IX/IXa變體及其使用方法。

本申請根據35 U.S.C.§119(e)要求2016年7月27日提交的美國臨時專利申請號62/367,321的優先權。上述申請通過引用并入本文。

技術領域

本發明涉及醫學和血液學領域。更具體地，本發明提供了新的因子IX變體和使用其來調節有需要的患者的凝血級聯的方法。

背景技術

在整個說明書中引用了若干出版物和專利文獻，以描述本發明所屬領域的現有技術。這些引用中的每一個都通過引用并入本文，如同完整闡述一樣。

響應于血管損傷(例如切割)，凝結酶以逐步的方式被激活，最終導致在損傷部位形成血凝塊。在該級聯的最后步驟中由其無活性前體凝血酶原產生凝血酶，隨后產生纖維凝塊。活化的因子IX(FIXa)是此系統的關鍵組分，因為它是內在Xase復合物(intrinsicXase complex)的絲氨酸蛋白酶，該復合物還包括輔助因子活化的因子VIII(FVIIIa)。該酶在具有暴露的陰離子膜的細胞上組裝，迅速將因子X轉化為活化的因子X(FXa)。FXa及其輔助因子，活化的因子V(FVa)，形成凝血酶原酶(prothrombinase)，即活化凝血酶的酶復合物。

因子IX的重要性通過在攜帶因子IX基因突變的個體中出血性病癥血友病B的出現來反映。在諸如血友病B的出血性病癥中，因子IX的缺陷或缺乏導致FXa產生不足，并且因此導致凝血酶形成不足。替代缺失的蛋白質是血友病治療的主要方法。盡管有效，但目前的蛋白質替代療法存在一些局限性。例如，目前的療法受到所施用蛋白質的短半衰期的影響，因此需要高劑量的多次靜脈內注射。因此，顯然需要具有改善的生物學特性的凝血因子。

發明內容

根據本發明，提供了用于在有此需要的患者中調節止血的組合物和方法。更具體地，提供了調節(例如，增加)止血的因子IX/因子IXa變體。在一個具體實施方案中，所述變體包含下列的至少一個取代：在位置410處的Glu；在位置223處的Val；在位置342處的Phe；在位置343處的Thr；和/或在位置406處的Asn。在一個具體實施方案中，所述變體包含下列的至少一個取代：在位置410處的Glu；在位置223處的Val；和/或在位置406處的Asn。在一個具體實施方案中，所述因子IX/因子IXa變體還包含在位置338處的Arg的取代，具體地，是用Leu取代位置338處的Arg。還公開了編碼本發明的變體的核酸及其使用方法。此類核酸分子可任選地編碼細胞內切割位點(例如，PACE/弗林蛋白酶(PACE/furin))。本發明的另一方面包括表達本發明變體的宿主細胞。還公開了分離和純化變體的方法。

還提供了在載體中包含本發明變體的藥物組合物。本發明還包括用于治療有此需要的患者的止血相關病癥的方法，包括向受試者施用治療有效量的所述變體或編碼該變體的核酸分子。這些方法有效治療需要促凝血劑(例如，以減少或抑制出血)的病癥，并且所述病癥包括但不限于血友病，具體地，血友病B。

附圖說明

圖1A提供了人前原因子IX(Pre-Pro-Factor IX)的氨基酸序列(SEQ ID NO：1)。基于因子IX編號，下劃線和粗體殘基是位置223、338、342、343、406和410處(參見圖1B)。圖1B提供了因子IX的輕鏈(SEQ ID NO：2)和重鏈(SEQ ID NO：3)的氨基酸序列。圖1C提供了活化因子IX(FIXa)的輕鏈(SEQ ID NO：2)和重鏈(SEQ ID NO：4)的氨基酸序列。圖1D提供了編碼人因子IX前原蛋白(preproprotein)的核酸序列(SEQ ID NO：5)。

圖2提供了在施用編碼FIX R338L+E410K(n＝7)或野生型FIX(n＝2)的載體AAV8后血友病小鼠中FIX的比活性的圖。值顯示為平均值±SEM。

具體實施方式