[發(fā)明專利]免疫組庫序列擴(kuò)增方法及應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201780056489.6
• 申請(qǐng)日: 2017-09-14
• 公開（公告）號(hào): CN110225972A
• 公開（公告）日: 2019-09-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: C·J·埃米格;M·米納
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 奧明塔生物技術(shù)公司
• 主分類號(hào): C12N15/10
• 分類號(hào): C12N15/10;C07K16/00;C40B50/06;G01N33/52;C12N15/11
• 代理公司: 北京同恒源知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11275
• 代理人: 王維綺

本發(fā)明總體涉及免疫結(jié)合蛋白以及從基因組或其他來源獲得免疫結(jié)合蛋白的方法的領(lǐng)域。本發(fā)明還涉及編碼免疫結(jié)合蛋白的核酸，其中鏈的天然多聚結(jié)合在核酸和由其產(chǎn)生的免疫結(jié)合蛋白中維持。例如，使用本發(fā)明的方法編碼從B細(xì)胞擴(kuò)增的抗體的核酸維持來自B細(xì)胞的重鏈和輕鏈的天然配對(duì)。該配對(duì)(或多聚化)的維持產(chǎn)生免疫結(jié)合蛋白的文庫和/或組庫，其被富集用于有用的結(jié)合分子。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明總體涉及免疫結(jié)合蛋白領(lǐng)域以及從基因組或其它來源獲得免疫結(jié)合蛋白的方法。本發(fā)明還涉及編碼免疫結(jié)合蛋白的核酸，其中鏈的天然多聚結(jié)合維持在核酸和由其產(chǎn)生的免疫結(jié)合蛋白中。例如，編碼使用本發(fā)明的方法從B細(xì)胞擴(kuò)增的抗體的核酸維持來自B細(xì)胞的重鏈和輕鏈的天然配對(duì)。該配對(duì)(或多聚化)的維持產(chǎn)生免疫結(jié)合蛋白的文庫和/或組庫，其被富集用于有用的結(jié)合分子。

背景技術(shù)

對(duì)能夠發(fā)現(xiàn)針對(duì)特定抗原的抗體存在相當(dāng)?shù)呐d趣。這類抗體可用作研究工具并用于診斷和治療應(yīng)用。不過，這類有用抗體的識(shí)別是困難的，并且一旦被識(shí)別，這些抗體在適合于人類的治療應(yīng)用之前通常需要相當(dāng)多的重新設(shè)計(jì)。

用于識(shí)別抗體的很多方法涉及通過擴(kuò)增來自B細(xì)胞或其他組織的核酸而衍生的抗體文庫的展示。這些方法的局限性限制了從文庫中獲得的有用抗體。例如，大多數(shù)抗體文庫并不配對(duì)從記憶B細(xì)胞或漿細(xì)胞獲得的重鏈和輕鏈，所述記憶B細(xì)胞或漿細(xì)胞已經(jīng)對(duì)免疫應(yīng)激產(chǎn)生了有效的免疫應(yīng)答。此外，大多數(shù)已知的人類抗體文庫僅包含可以通過實(shí)驗(yàn)從生物來源(例如，B細(xì)胞)捕獲或克隆的抗體序列多樣性。因此，這類文庫可能過度代表某些序列，而完全缺乏或未充分代表其他序列，尤其是形成有用抗體的配對(duì)輕鏈和重鏈，特別是來自成功的免疫應(yīng)答的那些。

本發(fā)明的一個(gè)目的是提供被富集用于有用的免疫結(jié)合蛋白的免疫結(jié)合蛋白文庫。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供制備被富集用于免疫結(jié)合蛋白的有用多聚體的此類文庫的方法。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供用于從B細(xì)胞和漿細(xì)胞擴(kuò)增核酸的方法，從而維持輕鏈和重鏈的配對(duì)。本發(fā)明的一個(gè)目的是通過獲得來自個(gè)體的配對(duì)輕鏈和重鏈抗體來獲得與疾病治療相關(guān)的抗體文庫，所述個(gè)體已經(jīng)對(duì)與例如傳染性疾病、癌癥、自身免疫性疾病、神經(jīng)退化性疾病和過敏癥相關(guān)的各種免疫應(yīng)激產(chǎn)生了抗體應(yīng)答。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明涉及編碼免疫結(jié)合蛋白的核酸，其保留構(gòu)成免疫結(jié)合蛋白(例如，抗體、T淋巴細(xì)胞受體或先天免疫受體)的免疫多肽鏈的體內(nèi)多聚結(jié)合。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明涉及被富集用于編碼多聚體的核酸的免疫結(jié)合蛋白文庫，所述多聚體功能性地代表在獲得免疫結(jié)合蛋白文庫的細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的多聚復(fù)合物。在一些實(shí)施例中，編碼免疫結(jié)合蛋白的多肽鏈的核酸來源于已經(jīng)產(chǎn)生了與例如傳染性疾病、癌癥、自身免疫性疾病、過敏癥或神經(jīng)退化性疾病相關(guān)的免疫應(yīng)答的個(gè)體。在一些實(shí)施例中，傳染性疾病由流感病毒引起。在一些實(shí)施例中，傳染性疾病由病毒引起，例如，HIV(艾滋病毒)、Ebola(埃博拉病毒)、Zika(寨卡病毒)、HSV(單純皰疹病毒)、RSV(呼吸道合胞病毒)或CMV(巨細(xì)胞病毒)。在一些實(shí)施例中，癌癥是黑色素瘤。在一些實(shí)施例中，癌癥是響應(yīng)免疫療法的癌癥。

本發(fā)明涉及編碼本發(fā)明的免疫結(jié)合蛋白的多肽鏈(例如，重鏈和輕鏈抗體多肽)的核酸，其保留體內(nèi)功能性配對(duì)的多肽鏈(例如，抗體的輕鏈和重鏈)。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明的免疫結(jié)合蛋白文庫被富集用于編碼多肽鏈的核酸的功能性多聚體，所述多肽鏈構(gòu)成免疫結(jié)合蛋白(例如，抗體的輕鏈和重鏈)并在從中獲得免疫結(jié)合蛋白文庫的組庫中結(jié)合在一起。在一些實(shí)施例中，編碼免疫結(jié)合蛋白的相關(guān)多肽鏈(例如，配對(duì)的輕鏈和重鏈)的核酸來源于個(gè)體，所述個(gè)體已經(jīng)產(chǎn)生了與例如傳染性疾病、癌癥、自身免疫性疾病、過敏癥和神經(jīng)退化性疾病相關(guān)的免疫應(yīng)答。在一些實(shí)施例中，傳染性疾病由流感病毒引起。在一些實(shí)施例中，傳染性疾病由病毒引起，例如，HIV、Ebola、Zika、HSV、RSV或CMV。