[發明專利]免疫組庫序列擴增方法及應用

在審

• 申請號: 201780056489.6
• 申請日: 2017-09-14
• 公開（公告）號: CN110225972A
• 公開（公告）日: 2019-09-10
• 發明（設計）人: C·J·埃米格;M·米納
• 申請（專利權）人: 奧明塔生物技術公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C07K16/00;C40B50/06;G01N33/52;C12N15/11
• 代理公司: 北京同恒源知識產權代理有限公司 11275
• 代理人: 王維綺

1.一種用于制備核酸的方法，包括步驟：

提供多個宿主細胞，其中宿主細胞包括編碼多聚免疫結合蛋白的多條多肽鏈的核酸，并且其中宿主細胞表達可結合抗原的免疫結合蛋白；

將多個宿主細胞暴露于多個抗原，其中每個抗原具有識別抗原的獨特條形碼，并且其中每個抗原單獨暴露于宿主細胞；

識別與宿主細胞結合的抗原；

向結合了抗原的宿主細胞添加第一引物組、第二引物組、第三引物組、多個dNTP和聚合酶；

其中第一引物組包括正向引物和反向引物，其中第一引物組的引物之一具有編碼免疫結合蛋白的第二多肽鏈的核酸的重疊延伸區，另一引物具有編碼條形碼的核酸的重疊延伸區，其中第一引物組擴增編碼多聚免疫結合蛋白的第一多肽鏈的核酸；

其中第二引物組包括正向引物和反向引物，其中第二引物組的引物之一具有編碼第一多肽鏈的核酸的重疊延伸區，其中第二引物組擴增編碼免疫結合蛋白的第二多肽鏈的核酸；

其中第三引物組包括正向引物和反向引物，其中第三引物組的引物之一具有編碼第一多肽鏈的核酸的重疊延伸區，其中第三引物組擴增編碼條形碼的核酸；

使第一引物組、第二引物組、第三引物組、dNTP、聚合酶、條形碼、編碼多聚免疫結合蛋白的核酸和抗原與條形碼反應，從而獲得編碼第一免疫多肽鏈、第二免疫多肽鏈和條形碼的單個核酸。

2.根據權利要求1所述的方法，其中多聚免疫結合蛋白是抗體。

3.根據權利要求1所述的方法，其中多聚免疫結合蛋白是T細胞受體。

4.根據權利要求1所述的方法，其中細胞在乳劑中。

5.一種用于制備一組核酸的方法，包括步驟：

提供多個宿主細胞，其中宿主細胞包括編碼多聚免疫結合蛋白的多條多肽鏈的核酸，并且其中宿主細胞表達可以結合抗原的免疫結合蛋白；

將多個宿主細胞暴露于多個抗原，其中每個抗原具有識別抗原的獨特條形碼，并且其中每個抗原暴露于宿主細胞；

識別與宿主細胞結合的抗原；

向結合了抗原的宿主細胞添加第一引物組、第二引物組、第三引物組、多個dNTP和聚合酶；

其中第一引物組包括正向引物和反向引物，其中第一引物組的引物之一具有獨特的核酸條形碼，并且其中所述引物組擴增編碼多聚免疫結合蛋白的第一多肽鏈的核酸；

其中第二引物組包括正向引物和反向引物，其中第二引物組的引物之一具有相同的核酸條形碼，并且其中所述引物組擴增編碼多聚免疫結合蛋白的第二多肽鏈的核酸；

其中第三引物組包括正向引物和反向引物，其中第三引物組的引物之一具有相同的核酸條形碼，并且其中所述引物組擴增編碼抗原條形碼的核酸；

使第一引物組、第二引物組、第三引物組、dNTP、聚合酶、編碼多聚免疫結合蛋白的核酸和抗原與抗原條形碼反應，從而獲得一組核酸，所述核酸編碼核酸條形碼與第一免疫多肽鏈、第二免疫多肽鏈和抗原條形碼的每一個。

6.根據權利要求5所述的方法，其中包含核酸條形碼的引物被附著在珠上。

7.根據權利要求5所述的方法，其中細胞在孔中。

8.根據權利要求5所述的方法，其中細胞在乳劑中。

9.根據權利要求5所述的方法，其中多個細胞在由表面張力保持到表面的多個液滴的陣列中。

10.根據權利要求5所述的方法，其中多個細胞通過水凝膠的方式在空間上分離。

11.根據權利要求5所述的方法，其中多聚免疫結合蛋白是抗體。

12.根據權利要求5所述的方法，其中多聚免疫結合蛋白是T細胞受體。