[發(fā)明專利]用于測量細(xì)胞中離子通道活性的組合物和方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201780056078.7
• 申請日: 2017-08-16
• 公開（公告）號: CN109690317B
• 公開（公告）日: 2023-05-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: D·比查姆;K·吉;A·盧卡維什尼科夫
• 申請（專利權(quán)）人: 生命科技股份有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;C07D493/10
• 代理公司: 上海專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 31100
• 代理人: 陶家蓉

1.一種用于檢測細(xì)胞中鉀離子通道的活性的方法，其包含：

a)使所述細(xì)胞與上樣緩沖液接觸，其中所述細(xì)胞包含鉀離子通道，其中所述上樣緩沖液包含鉈離子指示劑；

b)向所述細(xì)胞施加刺激緩沖液，其中所述刺激緩沖液包含鉈離子，從而使鉈離子通過所述鉀離子通道流入所述細(xì)胞，所述刺激緩沖液包括濃度使得含有細(xì)胞的孔中鉀離子的最終濃度在10-150mM范圍內(nèi)的鉀鹽；和

c)測量響應(yīng)于鉈流入的所述鉈離子指示劑的至少一種光學(xué)特性的變化，從而檢測所述鉀離子通道的所述活性，

其中所述鉈離子指示劑具有如下所示的結(jié)構(gòu)：

其中R₂＝H，并且R₁＝

其中R₃、R₄獨立地是C₁-C₆烷基；

并且

其中R₇是H、CH₃或C₂-C₆烷基或其鹽。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述刺激緩沖液包含小于4.5mM的鉈離子濃度。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其還包含量化鉈離子流入的水平。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述鉈離子指示劑的所述至少一種光學(xué)特性是極性、頻率或光密度。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述至少一種光學(xué)特性是發(fā)光強(qiáng)度，其中所述方法還包含測量響應(yīng)于鉈離子流入的所述鉈離子指示劑的所述發(fā)光強(qiáng)度的變化。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述上樣緩沖液不含氯化物。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述上樣緩沖液還包含生理濃度的氯離子。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述細(xì)胞是哺乳動物細(xì)胞。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其還包含在使所述細(xì)胞與所述上樣緩沖液接觸后洗滌所述細(xì)胞。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述鉈離子為鹽的形式。

11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中所述鉈離子能溶于所述上樣緩沖液中。

12.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中所述鉈離子是Tl₂SO₄、Tl₂CO₃、TlCl、TlOH、TlOAc或TNNO₃。

13.一種用于檢測細(xì)胞中鉀離子通道的活性的試劑盒，所述試劑盒包含：

上樣緩沖溶液，其中所述上樣緩沖溶液包含鉈離子指示劑；和刺激緩沖液，其中所述刺激緩沖液包含鉈離子，并且其中所述刺激緩沖液使鉈離子通過所述離子通道流入所述細(xì)胞，所述刺激緩沖液包括濃度使得含有細(xì)胞的孔中鉀離子的最終濃度在10-150mM范圍內(nèi)的鉀鹽；其中所述鉈離子指示劑具有如下所示結(jié)構(gòu)：

其中R₂＝H，并且R₁＝

其中R₃、R₄獨立地是C₁-C₆烷基；

并且

其中R₇是H、CH₃或C₂-C₆烷基或其鹽。