[發明專利]用于純化雙鏈核酸的方法和組合物

在審

• 申請號: 201780055280.8
• 申請日: 2017-09-12
• 公開（公告）號: CN109661467A
• 公開（公告）日: 2019-04-19
• 發明（設計）人: P.貝拉雷;C.霍爾庫姆;A.卡西拉;T.赫里斯;Q.阮;K.坎帕尼;I.科茨洛夫
• 申請（專利權）人: 豪夫邁·羅氏有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C12Q1/6806
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 權陸軍;楊思捷

1.用于回收與磁性玻璃珠粒(MGP)非共價結合的雙鏈核酸的自動化方法，其包括：

a) 將磁場施加至盛放溶液中的與MGP非共價結合的雙鏈核酸的容器，并去除未與MGP結合的液體；

b) 在低于50℃的溫度下在所述容器中使與MGP非共價結合的雙鏈核酸與洗脫緩沖液接觸；

c) 將磁場施加至所述容器；

d) 收集未與MGP結合的液體，由此收集洗脫物；

e) 在低于50℃的溫度下在所述容器中使與MGP非共價結合的雙鏈核酸與洗脫緩沖液接觸；

f) 將磁場施加至所述容器；和

g) 收集未與MGP結合的液體，由此收集洗脫物；

其中步驟d)和g)中收集的洗脫物包含從MGP回收的雙鏈核酸。

2.權利要求1的自動化方法，其中步驟b)和e)中的溫度為25℃至47℃。

3.權利要求1或2的自動化方法，其中所述雙鏈核酸長度為50-500個堿基對。

4.權利要求1-3中任一項的自動化方法，其中所述雙鏈核酸來自選自血液、血漿、血清、羊水、腦脊液和尿液的樣品。

5.權利要求1-4中任一項的自動化方法，其中步驟a)中的所述溶液具有小于7的pH。

6.權利要求1-5中任一項的自動化方法，其中步驟a)中的所述溶液具有小于6.5的pH。

7.權利要求1-6中任一項的自動化方法，其中所述洗脫緩沖液具有大于7的pH。

8.權利要求1-7中任一項的自動化方法，其中步驟d)和g)中收集的所述洗脫物中的核酸包含至少50%雙鏈核酸。

9.權利要求1-8中任一項的自動化方法，其在步驟a)之前進一步包括：

在容器中使含有雙鏈核酸的液體樣品與MGP接觸，由此在所述容器中允許雙鏈核酸非共價結合溶液中的MGP；

將磁場施加至所述容器，并去除未與MGP結合的液體，由此留下與MGP非共價結合的雙鏈核酸；和

將液體添加至與MGP非共價結合的雙鏈核酸。

10.權利要求1-9中任一項的自動化方法，其中在步驟b)和e)中使所述洗脫緩沖液和與MGP非共價結合的雙鏈核酸接觸至少5分鐘。

11.權利要求1-10中任一項的自動化方法，其中在步驟b)和e)中使所述洗脫緩沖液和與MGP非共價結合的雙鏈核酸接觸5-25分鐘。

12.權利要求1-11中任一項的自動化方法，其中使用自動化移液器將洗脫緩沖液和與MGP非共價結合的雙鏈核酸混合。