[發明專利]在體外分化誘導多能性干細胞的方法

在審

• 申請號: 201780054309.0
• 申請日: 2017-08-03
• 公開（公告）號: CN109661461A
• 公開（公告）日: 2019-04-19
• 發明（設計）人: 出澤真理
• 申請（專利權）人: 株式會社生命科學研究院
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;C12N5/074;C12Q1/04;C12N15/09
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所 11038
• 代理人: 鄭天松

本發明旨在提供削減成本和時間，更安全性優良的產業應用的可能性高的細胞創造技術。根據本發明，提供在體外將多能性干細胞分化誘導為與信息呈遞細胞有相同的表現型及功能的細胞的方法，其包括將多能性干細胞或該多能性干細胞被濃縮的細胞級分與來源于信息呈遞細胞的損傷細胞或死細胞或其一部分共培養。

【技術領域】

本發明涉及在體外分化誘導多能性干細胞的方法。更具體而言，本發明涉及在體外將多能性干細胞分化誘導為與信息呈遞細胞有相同的表現型及功能的細胞的方法，其包括將多能性干細胞或該多能性干細胞被濃縮的細胞級分與來源于信息呈遞細胞的損傷細胞和/或死細胞(含它們的一部分)共培養。

【背景技術】

近年，推進從多能性干細胞分化誘導的研究，期待分化誘導的各種細胞向再生醫療、藥物開發研究、藥物安全性試驗等的各種各樣的用途的應用。

在再生醫療中，通過向對象疾病移植從本身或異體采集的多能性干細胞或儲存的多能性干細胞、或者從這些多能性干細胞分化誘導的細胞，嘗試治療疾病。另外，在藥物開發研究中，在解析或篩選中利用從來源于健康者的多能性干細胞或從患者得到的疾病特異性的多能性干細胞分化誘導的作為目的的細胞，期待開發對于該疾病的新藥。再者，在藥物安全性試驗中，期待在開發中或被開發的醫藥的毒性的篩選中使用分化誘導的細胞。

為了可在醫療的現場或產業上利用以這樣的用途作為目的的細胞，有從多能性干細胞、多能性干細胞大量、穩定、并且容易地得到分化誘導的細胞的必要。報告了從多能性干細胞分化誘導作為目的的各種細胞的嘗試，但已知在分化誘導過程中向多能性干細胞導入特定的基因的方法(專利文獻1等)、在添加各種細胞因子的培養基中分化多能性干細胞的方法(專利文獻2)。但是，這樣的分化誘導法的誘導順序煩瑣，另外為了誘導細胞而經長期間(例如，數周)，從而無法認為是容易的方法，再者成本也非常地高。

一方面，也提議不使用細胞因子而分化誘導心肌細胞的方法(非專利文獻1)。在此提議中，無飼養層培養后，單離為單細胞，其后，以高密度接種，進行接附培養。但是，有如果不是能在無飼養層培養中馴化的細胞就難以分化這樣的問題。

另外，作為成為分化誘導的前提的多能性干細胞之一，作為典型例舉以由作為本發明人的一人的出澤氏發現的存在于間充質細胞級分的SSEA-3(階段特異性胚胎抗原-3，Stage-specific embryonic antigen-3)作為表面抗原表達的Muse(多系分化應激耐受，Multilineage-differentiating Stress Enduring cells)(專利文獻3；非專利文獻2)。Muse細胞與其他作為多能性干細胞已知的人工多能性干細胞(iPS細胞)、胚胎干細胞(ES細胞)、神經干/前體細胞(NSPC)、臍帶血干細胞(UCBC)不同，細胞的籌備容易，如iPS細胞一樣不以用于其籌備的基因導入作為必要，無腫瘤形成能。

Muse細胞在再生醫療中的貢獻至今知之甚多，可在心肌梗塞、腦腫瘤、腦梗塞、腎障礙等的治療中發現(專利文獻4等)。例如，在心肌梗塞的治療中確證，通過將Muse細胞從靜脈注入，Muse細胞到達梗塞部位，分化為心肌細胞而達成心肌梗塞的治療。一方面，還緩慢地得知向靜脈施用的Muse細胞向疾病部位游走的機制，例如，提示與被認為從疾病部位釋放的SIP1等的趨化因子(損傷信號)相關(專利文獻5)。但是，未解明Muse細胞分化為構成疾病部位的組織的細胞的詳細的機制。