[發明專利]用于病原性微生物檢測的方法及試劑盒

在審

• 申請號: 201780054148.5
• 申請日: 2017-09-04
• 公開（公告）號: CN109689882A
• 公開（公告）日: 2019-04-26
• 發明（設計）人: 野地博行;田端和仁
• 申請（專利權）人: 國立研究開發法人科學技術振興機構
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04;C12M1/34;C12Q1/34;C12Q1/70;G01N33/483
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責任公司 11021
• 代理人: 曹陽

1.一種方法，

是檢測從感染了病原性微生物的對象或有感染的嫌疑的對象中分離出的生物試樣中的所述病原性微生物的方法，

該方法包括：

導入步驟，向下層部與上層部之間的空間導入包含所述生物試樣、和成為存在于所述病原性微生物的表面或內部的酶所致的反應的底物的物質的親水性溶劑，所述下層部由具有疏水性的上表面的側壁彼此隔開地形成有能夠收容所述病原性微生物的多個收容部，所述上層部與該下層部的形成有該收容部的面相面對；

封入步驟，向所述空間導入疏水性溶劑，在所述收容部內形成由疏水性溶劑包覆并且包含所述病原性微生物和所述物質的親水性溶劑的液滴；以及

檢測步驟，以光學方式檢測因所述液滴中的所述酶與所述物質的反應而生成的反應產物，

所述親水性溶劑具有大于所述反應產物的酸解離常數pKa的pH值。

2.根據權利要求1所述的方法，其中，

所述病原性微生物為流感病毒，

所述酶為神經氨酸酶，

所述物質為4－甲基傘形酮基－α－D－神經氨酸，

所述反應產物為4－甲基傘形酮。

3.一種試劑盒，用于檢測從感染了病原性微生物的對象或有感染的嫌疑的對象中分離出的生物試樣中的所述病原性微生物，

該試劑盒包含：

陣列，其具備下層部和上層部，所述下層部由具有疏水性的上表面的側壁彼此隔開地形成有能夠收容所述病原性微生物的多個收容部，所述上層部與所述下層部的形成有所述收容部的面隔開空間地相面對；

物質，其成為存在于所述病原性微生物的表面或內部的酶所致的反應的底物；

親水性溶劑，其具有大于因所述酶與所述物質的反應而生成的反應產物的酸解離常數pKa的pH值；以及

疏水性溶劑。

4.一種方法，在與疏水性溶劑發生界面接觸的親水性溶劑中使酶與成為該酶所致的反應的底物的物質反應、并檢測反應產物，

所述親水性溶劑具有大于所述反應產物的酸解離常數pKa的pH值。

5.根據權利要求4所述的方法，其中，

所述親水性溶劑包含病原性微生物，

所述酶為存在于所述病原性微生物的表面或內部的具有底物切割活性的酶，

所述物質為顯色底物，

以光學方式檢測因所述酶所致的所述顯色底物的切割而生成的反應產物。

6.根據權利要求5所述的方法，其中，

所述病原性微生物為流感病毒，

所述酶為神經氨酸酶，

所述顯色底物為4－甲基傘形酮基－α－D－神經氨酸，

所述反應產物為4－甲基傘形酮。

7.根據權利要求5或6所述的方法，其中，

所述親水性溶劑包含從感染了所述病原性微生物的對象或有感染的嫌疑的對象中分離出的生物試樣。