[發明專利]用于高溫固相肽合成的原位溶劑回收方法

在審

• 申請號: 201780053940.9
• 申請日: 2017-04-19
• 公開（公告）號: CN109715647A
• 公開（公告）日: 2019-05-03
• 發明（設計）人: 喬納森·M·柯林斯
• 申請（專利權）人: CEM有限公司
• 主分類號: C07K1/04
• 分類號: C07K1/04;C07K1/06
• 代理公司: 北京林達劉知識產權代理事務所(普通合伙) 11277
• 代理人: 劉新宇;李茂家

公開了對固相肽合成中脫保護的改進。該方法包括以下步驟：將高濃度和小體積的脫保護組合物添加至偶聯溶液、生長肽鏈和來自先前偶聯循環的任何過量活化氨基酸的混合物中；在先前循環的偶聯步驟和相繼循環的脫保護組合物的添加之間沒有任何排液步驟；以及在至少30℃的溫度下使用偶聯溶液。

相關申請

本申請是2016年10月21日提交的序列號為15299931的“固相肽合成的改進”的部分延續案。

背景技術

通過運用過濾以去除步驟間的試劑，Bruce Merrifield開創的固相肽合成的發展為合成肽鏈創造了一種有用的方法。該方法涉及重復循環，其包括偶聯和脫保護，以及在每個步驟之間的洗滌和過濾(圖1)。

通常假設在每個步驟之間需要洗滌以完全去除先前使用的試劑，使得它們不會不期望地參與下一步驟。這通常涉及“插入”，其指的是摻入額外的氨基酸。這被認為是通過如下方式發生：通過殘留堿去除新近偶聯的氨基酸上的保護基團(Fmoc)從而允許第二個氨基酸“插入”；或者通過在隨后的脫保護步驟中留下的可以偶聯到解封閉(deblock)的位點的殘留活性氨基酸，從而“插入”來自先前步驟的額外氨基酸。然而，最近顯示，偶聯步驟后的洗滌不是成功合成肽所必需的。在該工作中，偶聯步驟排液，隨后將去保護溶液添加至容器中(J.Collins,K.Porter,S.Singh和G.Vanier,“High-Effective Solid Phase PeptideSynthesis(HE-SPPS)”Org.Lett.,vol.16,pp.940-943,2014)(圖2)。

發明內容

本發明是一種在固相肽合成中脫保護的方法，其中改進包括將高濃度和和小體積的脫保護組合物添加至偶聯溶液、生長肽鏈和來自先前偶聯循環的任何過量活化氨基酸的混合物中；在先前循環的偶聯步驟和相繼循環的脫保護組合物的添加之間沒有任何排液步驟；并且使用至少30℃的偶聯溶液。

另一方面，本發明是一種在固相肽合成中脫保護的方法，其中改進包括將高濃度和小體積的脫保護組合物添加至偶聯溶液、生長肽鏈和來自于先前偶聯循環的任何過量的活化氨基酸的混合物中；并且在先前循環的偶聯步驟和相繼循環的脫保護組合物的添加之間沒有任何排液步驟，所述排液步驟去除先前循環偶聯溶液的至少50％的體積；并且在至少30℃的溫度下使用偶聯溶液。

基于以下結合附圖的詳細描述，本發明的前述和其他目的和優點以及實現本發明的方式將變得更加清楚。

附圖說明

圖1顯示了傳統的SPPS循環。

圖2顯示了更近期的高效固相肽合成(HE-SPPS)的SPPS循環。

圖3說明了用于固相肽合成的原位溶劑的再循環方法。

具體實施方式

本發明提出了一種新方法，其中偶合和脫保護步驟在相同溶劑中進行。在該方法中，在用于偶聯發生所需的一段時間后，將濃縮的堿直接添加至樹脂偶聯溶液中。然后脫保護步驟在添加堿時立即開始。因此，脫保護步驟是在偶聯步驟之后立即開始的而沒有任何時間延遲。

另外，僅需要少量堿，因為它可以使用偶聯反應中存在的溶劑。這需要一個復雜的試劑遞送系統用于精確地以非常小的體積(0.5mL)快速遞送堿。通常，在溶劑中的20％的堿(哌啶)溶液用于脫保護步驟。過量的堿濃度可以增加堿催化的副反應，因此需要大量的溶劑。這意味著通過向偶聯溶劑中添加濃縮堿可以從該方法中節省大量溶劑。

為了證明這種新方法的有效性，使用經修改的自動肽合成儀裝配了一個批次的24種肽，以在每個循環期間進行原位溶劑再循環步驟。

材料和方法：