[發(fā)明專利]內(nèi)部封定脂囊泡

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201780047543.0
• 申請(qǐng)日: 2017-07-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109715789B
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-04-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 胡哲銘;陳慧文;陳婉宜;簡(jiǎn)禎瑩;林榮辰
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 劉扶東
• 主分類號(hào): C12N5/09
• 分類號(hào): C12N5/09;C12N5/0784;C12N5/078;G01N33/50
• 代理公司: 北京三友知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11127
• 代理人: 韓蕾;姚亮

一種生成內(nèi)部封定脂囊泡的方法，包含：提供前驅(qū)脂囊泡，其具備包覆于脂質(zhì)膜內(nèi)的水性內(nèi)壁，其中前驅(qū)脂囊泡的脂質(zhì)膜對(duì)交聯(lián)劑不具通透性；使脂質(zhì)膜短暫地具備通透性，以生成具通透性的囊泡；使具通透性的囊泡與不具活性但可活化的交聯(lián)劑接觸，不具活性但可活化的交聯(lián)劑藉此進(jìn)入具通透性的囊泡中；使具通透性的囊泡回復(fù)成不具通透性的囊泡；清除任何囊泡外的交聯(lián)劑；及活化不具活性但可活化的交聯(lián)劑，使不具通透性的囊泡中產(chǎn)生交聯(lián)反應(yīng)，以生成內(nèi)部封定的脂囊泡。

相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用

本申請(qǐng)案主張于2016年8月1日申請(qǐng)的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)案第62/369,440號(hào)的優(yōu)先權(quán)，該臨時(shí)申請(qǐng)案的全部?jī)?nèi)容以引用方式并入本文中。

背景技術(shù)

細(xì)胞膜由雙層脂質(zhì)(lipid?bilayer)、蛋白質(zhì)及聚糖組成，以上物質(zhì)共同構(gòu)成一細(xì)致界面，負(fù)責(zé)掌控細(xì)胞標(biāo)志及物質(zhì)運(yùn)輸、信號(hào)傳導(dǎo)、細(xì)胞黏附等功能。雙層脂質(zhì)具備高度流動(dòng)性，可使細(xì)胞膜內(nèi)各種基團(tuán)側(cè)向流動(dòng)。此細(xì)致界面為許多生物學(xué)研究及生醫(yī)領(lǐng)域技術(shù)應(yīng)用的核心，而目前亦出現(xiàn)許多于一穩(wěn)固基質(zhì)上重構(gòu)此細(xì)致界面的實(shí)務(wù)應(yīng)用技術(shù)。細(xì)胞本質(zhì)上較為脆弱，易受各種影響表面生化反應(yīng)的生物機(jī)制(如細(xì)胞凋亡及囊泡出芽)左右。

目前維持細(xì)胞膜構(gòu)造的技術(shù)包括于平面或球狀基質(zhì)上重構(gòu)純化細(xì)胞膜，以及使用甲醛(formaldehyde)與戊二醛(glutarasldehyde)等化學(xué)交聯(lián)劑將細(xì)胞完整封定。然而，就重構(gòu)復(fù)雜且具流動(dòng)性的細(xì)胞膜界面而言，這些技術(shù)仍有不足之處，例如在合成基質(zhì)上重構(gòu)純化細(xì)胞膜時(shí)，會(huì)面臨細(xì)胞膜雜質(zhì)、細(xì)胞膜破損、細(xì)胞膜覆蓋基質(zhì)不完全等問(wèn)題，而使用化學(xué)封定技術(shù)時(shí)，則會(huì)造成膜蛋白原始狀態(tài)改變、蛋白流動(dòng)性降低，并在生醫(yī)技術(shù)應(yīng)用過(guò)程中制造毒性。有鑒于生成穩(wěn)定且具流動(dòng)性的細(xì)胞膜界面存在諸多困難，許多以膜界面上分子間交互作用為核心的生物學(xué)研究及生醫(yī)技術(shù)應(yīng)用因此進(jìn)展有限。

發(fā)明內(nèi)容

根據(jù)本申請(qǐng)案所請(qǐng)發(fā)明的一態(tài)樣，提供一種生成內(nèi)部封定脂囊泡的方法。該方法包括提供前驅(qū)脂囊泡，其具備包覆于脂質(zhì)膜內(nèi)的水性內(nèi)壁，其中前驅(qū)脂囊泡的脂質(zhì)膜對(duì)交聯(lián)劑不具通透性；使脂質(zhì)膜短暫地具備通透性，以生成具通透性的囊泡；使具通透性的囊泡與不具活性但可活化的交聯(lián)劑接觸，不具活性但可活化的交聯(lián)劑藉此進(jìn)入具通透性的囊泡中；使具通透性的囊泡回復(fù)成不具通透性的囊泡；清除任何囊泡外交聯(lián)劑；及活化不具活性但可活化的交聯(lián)劑，使不具通透性的囊泡中產(chǎn)生交聯(lián)反應(yīng)，以生成內(nèi)部封定的脂囊泡。

在某些實(shí)施例中，前驅(qū)脂囊泡為細(xì)胞或病毒。例如細(xì)胞可為哺乳動(dòng)物細(xì)胞或非哺乳動(dòng)物細(xì)胞，如人類細(xì)胞、非人類細(xì)胞、細(xì)菌細(xì)胞、真菌細(xì)胞、不朽化細(xì)胞、基因改造細(xì)胞、人造細(xì)胞、免疫細(xì)胞、上皮細(xì)胞、肝細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、腎細(xì)胞、纖維母細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、肌肉細(xì)胞、血球細(xì)胞、骨細(xì)胞、分泌細(xì)胞、干細(xì)胞、耳毛細(xì)胞、腦細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、肺細(xì)胞或癌細(xì)胞。